La formation des ponts disulfure des phosphatases dans l'espace periplasmique de escherichia coli : analyse du role du systeme dsb

par PASCAL BELIN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de D. BLANGY.

Soutenue en 1994

à Paris 6 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    L'espace periplasmique de escherichia coli contient de nombreuses proteines a ponts disulfure. La formation de ces ponts est une reaction d'oxydoreduction necessitant la presence d'un accepteur d'electrons approprie. L'efficacite de cette reaction dans le periplasme de e. Coli montre l'existence de systemes enzymatiques catalysant la formation des ponts disulfure dans les proteines exportees. A l'aide d'un crible genetique base sur une deficience simultanee en plusieurs phosphatases acides periplasmiques a ponts disulfure, nous avons obtenu des mutations empechant la formation de ces ponts. Le gene complementant ces mutations, dsba, specifie une proteine periplasmique possedant un motif actif cys-x-x-cys, commun aux proteines impliquees dans les echanges de ponts disulfure. Dsba agit directement en donnant son pont disulfure aux phosphatases reduites. Nous avons isole et caracterise un second type de mutants defectifs pour les activites phosphatases acides. Le gene incrimine, dsbb, specifie une proteine de la membrane interne responsable de la reoxydation de dsba. Son absence se traduit donc par un phenotype semblable a celui de mutants dsba. A l'aide de fusions dsba-phoa, nous avons caracterise une region de dsba importante pour sa stabilite et son activite. Cette region se retrouve tres conservee dans la thioredoxine (trxa), proteine cytoplasmique impliquee dans la reduction des ponts disulfure, dans laquelle elle possede egalement un role pour stabilite et activite. De plus, des predictions de structure secondaire effectuees sur dsba montrent une organisation semblable a trxa. Cela suggere fortement la conservation d'un motif de repliement entre ces deux proteines impliquees dans les echanges de ponts disulfure. Nous avons identifie deux promoteurs responsables de la transcription de dsba. Chacun participe de maniere equivalente a l'expression de la proteine dsba dans le periplasme. Curieusement, une diminution de cette expression ne change en rien la capacite de la bacterie a former les ponts disulfure. Presente en faible quantite dans le periplasme, dsba doit donc tres rapidement effectuer la formation des ponts disulfure et etre recyclee. Ces observations suggerent une cooperation etroite entre les systemes d'exportation et les proteines dsba et dsbb


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Informations

  • Détails : 235 P.
  • Annexes : 404 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Accessible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1994
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