Cinetiques de l'adsorption des proteines sur un support immunochromatographique. Application a l'etude des interactions albumine humaine-anticorps immobilises

par JAMES RENARD

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de C. VIDAL-MADJAR.

Soutenue en 1994

à Paris 6 .

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  • Résumé

    La cinetique d'adsorption des proteines sur un immunoadsorbant a ete etudiee par une nouvelle methode chromatographique. La theorie, recemment developpee au laboratoire, suppose une loi cinetique du second ordre de type langmuir. Elle est basee experimentalement sur la determination et l'etude de la fraction non retenue d'un solute injecte sur une colonne chromatographique. Cette theorie a ete appliquee a l'etude du processus cinetique d'association d'un antigene sur un anticorps immobilise. Le systeme etudie est constitue de l'albumine humaine et de l'anticorps anti-albumine humaine. L'immobilisation de l'anticorps a ete preferee a l'immobilisation de l'antigene car cette approche permet d'une part d'etudier sur une meme colonne chromatographique l'influence de differents parametres sur la reconnaissance antigene-anticorps, et d'autre part de consommer tres peu d'anticorps. Des colonnes d'anticorps polyclonal ayant des capacites variables ont ete preparees. La comparaison des resultats obtenus sur ces colonnes par analyse du dedoublement du pic d'elution et par analyse frontale permet de valider la nouvelle technique chromatographique. L'etude cinetique effectuee a l'aide de la methode du dedoublement du pic d'elution permet de dissocier le phenomene cinetique d'adsorption du au transfert de matiere a travers le film stagnant de celui caracterisant effectivement l'association. Apres avoir etudie l'adsorption de l'albumine sur l'anticorps polyclonal, nous nous sommes interesses a l'adsorption sur des anticorps monoclonaux. La presence d'une substance qui se lie a l'albumine peut modifier son adsorption sur un anticorps. L'etude cinetique sur des anticorps monoclonaux de specificite connue permet de mettre en evidence ce phenomene. La methode est particulierement bien adaptee a cette etude dans le cas de l'albumine glycosylee


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Informations

  • Détails : 228 P.
  • Annexes : 104 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Accessible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1994
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