Localisation, caracterisation et mode d'action d'un peptide antibacterien de la cuticule du ver a soie, bombyx mori. / purification et clonage d'une proteine inductible en phase aigue dans l'hemolymphe immunisee du ver a soie

par WON-JAE LEE

Thèse de doctorat en Sciences médicales

Sous la direction de P. BREY.

Soutenue en 1994

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Les recherches presentes peuvent etre regroupes en deux parties. En premier lieu, l'etude de l'activite antibiotique induite chez b. Mori apres abrasion de la cuticule en presence de bacteries a montre que des peptides antibacteriens sont synthetises de novo par les cellules du corps gras et de l'epiderme en reponse a l'agression bacterienne. L'activite est localisee dans les zones de cuticules abrasees et dans l'hemolymphe. Les resultats indiquent le role actif de la cuticule et des cellules de l'epiderme dans l'immunite des insectes. Ces peptides antibacteriens cuticulaires ont ete purifies en associant ultrafiltration et clhp. L'analyse de la structure primaire montre qu'il s'agit de cecropine, originellement mise en evidence chez hyalophora cecropia. La cecropine cuticulaire et ses analogues fluorochromes ont ete synthetises et leur mode d'action a ete etudie par des methodes spectrofluorometriques. La cecropine s'associe d'abord avec la membrane externe de la bacterie de facon aleatoire et non-cooperative par interactions electrostatiques sans former d'aggregat, ce qui lui permet de diffuser facilement vers la membrane interne. La lyse est plutot due a la desintegration de la membrane qu'a la formation de canaux ioniques transmembranaires. Dans la seconde partie concerne la caracterisation d'une proteine induite chez b. Mori, en phase aigue de reaction a la suite de l'immunisation par des bacteries. Cette proteine (50kda) a une grande affinite avec la paroi des bacteries. On observe une augmentation de sa concentration dans l'hemolymphe et dans la matrice cuticulaire apres l'infection bacterienne. Elle a ete purifiee a partir de serum immuns de b. Mori et le sequencage des peptides internes a ete realise, suivi d'une amplification par pcr. La banque de cdna de corps gras de b. Mori immunise a ete criblee par le produit de pcr pour obtenir le cdna codant pour la proteine de 50kda. Le sequencage de cdna montre que cette proteine a une homologie avec certaines proteines immunitaires des vertebres et des bacteries


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Informations

  • Détails : 206 P.
  • Annexes : 130 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Consultable sur place dans l'établissement demandeur
  • Cote : T Paris 6 1994 170
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1994
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