La Δ-5-3- cetosteroide isomerase de pseudomonas testosteroni : etude dans les micelles inverses et obtention d'abymes a activite similaire

par Bachra Khettal

Thèse de doctorat en Biochimie

Sous la direction de Solange de Lauzon.

Soutenue en 1994

à Paris 5 .


  • Résumé

    La cetosteroide isomerase est une enzyme-cle dans la biosynthese des hormones steroides. Son etude est importante sur le plan fondamental et sur le plan de la biotechnologie. Nous avons choisi d'etudier ce systeme par 2 approches originales et nous avons pris comme modele l'isomerase de pseudomonas tetosteroni, enzyme catalysant la meme reaction. 1) etude de la cinetique de l'isomerase dans 3 types de micelles inverses formees d'aot, de ctab ou de nikkol. Les 2 substrats utilisees sont de polarite differente (estren-17ol, 3-one et androstenedione). L'isomerase est apparue plus stable dans les micelles de ctab et de nikkol que dans celles d'aot. La stabilite est d'autant plus grande que w#o est eleve. La vitesse catalytique est dependante de w#o et l'activite est optimale a des w#o faibles. 2 effets opposes peuvent etre a l'origine de cette dependance : diminution de la concentration locale du substrat et diminution des contraintes subies par l'enzyme. L'activite catalytique est plus faible dans les micelles inverses que dans les solutions aqueuses, notamment pour le substrat le plus hydrophobe. Les resultats suggerent que l'activite est influence par l'hydrophobicite du substrat et que les interactions electrostatiques entre le tensioactif et l'enzyme ne sont pas un facteur limitant de l'activite. 2) production d'abzyme mimant l'isomerase : pour induire de tels anticorps, 3 molecules analogues de l'etat de transition de l'isomerase ont ete utilisees. Les potentiellement catalytiques ont ete selectionnes par elisa. 2 de ces anticorps accelerent l'isomerisation de l'androstenedione d'un facteur de 440 et 830 fois et sont inhibes compititivement par les haptenes inducteurs.


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  • Détails : 1 vol. (69 f. - Annexes non paginées)
  • Annexes : Bibliogr. 141 réf.

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