Production de collagene de type quatre et de collagenase quatre par les cellules endotheliales humaines cultivees en presence de differentes concentrations de glucose, et d'hormone de croissance : effets d'un inhibiteur de l'aldose reductase et d'un inhibiteur de proteine kinase c

par Ahmed Bakillah

Thèse de doctorat en Biochimie

Sous la direction de Michel Sternberg.

Soutenue en 1994

à Paris 5 .


  • Résumé

    L'epaississement des membranes basales capillaires caracterise la microangiopathie diabetique. Il est associe a une accumulation de collagene de type iv qui peut etre due a une augmentation de sa biosynthese et/ou a une diminution de sa degradation. Nous avons montre dans la premiere partie de notre etude que les cellules endotheliales provenant de la veine du cordon ombilical humain, cultivees en presence de forte concentration de glucose, diminuent en nombre et augmentent leur production de collagene de type iv dose par elisa, aussi bien dans le surnageant des cultures que dans la matrice extracellulaire et les cellules. Ceci s'accompagne d'une augmentation significative de l'incorporation de #1#4c-proline dans les proteines totales et collageniques dans le surnageant de culture, dans la matrice extracellulaire et les cellules. L'etude de l'activite collagenase de type iv libre et totale apres activation par l'apma a montre une baisse significative dans le surnageant de culture. Dans une deuxieme partie nous avons etudie l'effet d'un inhibiteur de l'aldose reductase, le sorbinil, qui s'est avere capable de prevenir cette augmentation de collagene iv et de corriger la diminution du nombre de cellules observee en presence de forte concentration de glucose. Le glucose est le principal facteur, mais apparemment pas le seul, qui soit responsable de l'epaississement des membranes basales au cours du diabete. Chez les diabetiques insulinodependants ayant une bonne equilibration glycemique, il existe en effet une inegalite individuelle dans la rapidite d'apparition et la gravite des lesions de retinopathie diabetique. Cette inegalite suggere qu'un ou plusieurs facteurs aggravants, autres que l'hyperglycemie, existent chez certains diabetiques. C'est dans cette perspective que nous avons etudie dans la troisieme partie de notre travail les effets de l'hormone de croissance (hgh) susceptible d'etre l'un de ces facteurs. Nous avons etudie l'effet hgh en traitement de 72h en l'absence de serum et en presence de differentes concentrations de glucose. Hgh augmente le nombre de cellules de facon dose-dependante uniquement en presence de glucose 5,5mm : l'augmentation est de 15% a la concentration de 100ng/ml de hgh. Hgh stimule la production de collagene de type iv aussi bien dans le surnageant de culture que dans la matrice extracellulaire et les cellules aux differentes concentrations de glucose. Hgh augmente l'incorporation de #1#4c-proline dans les proteines collageniques du surnageant, de la matrice extracellulaire et des cellules, a forte concentration de glucose seulement. Nous avons observe une augmentation significative de l'activite collagenase libre apres activation par l'apma en presence de 100ng/ml de hgh et de glucose 5,5mm. Nos resultats peuvent s'expliquer en partie par l'activation d'une ou plusieurs isoformes de proteine-kinase c (pkc) par la gh et le glucose. Cette hypothese est etayee par l'utilisation, dans la derniere partie de notre etude, d'un inhibiteur des pkc (gf109203x) qui a prevenu d'une facon significative la stimulation de la production de collagene iv sous forte concentration de glucose ou de hgh. Il a ete sans effet sur l'activite de la collagenase iv. Nos resultats suggerent que le glucose et la gh peuvent favoriser l'accumulation de collagene iv dans les membranes basales, observee dans la microangiopathie diabetique, par activation d'une ou plusieurs isoformes de pkc.


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  • Détails : 1 vol. (162 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 149-162

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