Peptidyl-oligonucleotides : synthese, routage intracellulaire et activite antivirale

par KHALIL ARAR

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de R. MAYER.

Soutenue en 1994

à Orléans .

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  • Résumé

    Les oligodesoxyribonucleotides antisens constituent des agents therapeutiques potentiels capables de bloquer, selectivement, l'expression d'oncogenes, de virus ou de parasites. Toutefois, la localisation intracellulaire des arnm cibles implique que, pour etre actifs, ces oligonucleotides doivent franchir la membrane plasmique et atteindre le cytosol. Dans le but d'aider les oligonucleotides a atteindre les compartiments intracellulaires profonds et d'eviter leur degradation dans les vesicules acides, nous nous sommes propose de modifier le trafic intracellulaire des oligonucleotides en les fixant sur des peptidyl-kdel. Le peptide signal lys-asp-glu-leu (kdel) est reconnu specifiquement par un recepteur membranaire au niveau d'un compartiment intermediaire entre le reticulum endoplasmique et le golgi. La synthese de peptidyl-oligonucleotides, a ete realisee par couplage de fragments a partir de peptides et d'oligonucleotides prepares separement, chacun avec sa propre chimie. Les oligonucleotides sont substitues sur l'une de leurs extremites par une fonction thiol. Les peptides, contenant la sequence signal kdel sur leur extremite c-terminale, possedent sur leur extremite n-terminale differents groupements capables de reagir avec la fonction thiol de l'oligonucleotide. Afin de pouvoir comparer l'effet de la nature de la liaison covalente entre le peptide et l'oligonucleotide sur l'activite biologique des conjugues nous avons prepare des conjugues possedant soit un pont disulfure, soit une liaison thioether. Les conjugues contenant une liaison thioether, stable en milieu reducteur, ont ete prepares selon deux methodes originales. Les peptides et les peptidyl-oligonucleotides ont ete purifies par hplc et caracterises par spectrometrie de masse. Il apparait que l'addition d'un peptidyl-kdel conduit les oligonucleotides dans des compartiments intracellulaires differents de ceux dans lesquels se trouvent en majorite les oligonucleotides libres. La modification du guidage intracellulaire des oligonucleotides entraine une augmentation de leur activite antivirale. En effet, malgre leur faible penetration dans la cellule, les conjugues oligonucleotide-peptide sont 2 a 3 fois plus actifs que l'oligonucleotide libre. Nous avons egalement montre que les conjugues obtenus par formation d'une liaison thioether sont 10 fois plus actifs que ceux contenant un pont disulfure


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  • Détails : 144 P.
  • Annexes : 148 REF.

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