Culture in vitro et transformation genetique de la vigne : mise au point de protocoles de micropropagation et de regeneration par organogenese et embryogenese chez des hybrides vitis x muscadinia. obtention, chez deux porte-greffe, de racines et de plantes transgeniques produisant la proteine capsidiale du virus de la mosaique chromee de la vigne (gcmv)

par LAURENT TORREGROSA

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de D. BOUGALS.

Soutenue en 1994

à l'ENSA MONTPELLIER .

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  • Résumé

    Dans l'optique de contribuer a la creation de porte-greffe de vigne resistant a la transmission du court-noue (gflv: grape fanleaf virus), l'objectif du travail etait de mettre au point des methodologies de transformation genetique permettant l'introduction du gene codant pour la proteine capsidiale du gflv dans le genome d'hybrides vitis x muscadinia (hvm) resistant a xiphinema index. Les essais de transformation ont d'abord consiste en des co-inoculations de vitroplants (hvm, v. Vinifera et porte-greffe) par des souches d'agrobacterium rhizogenes non desarmees et des souches d'a. Tumefaciens binaires possedant les plasmides pkhg quatre ou pkvhg deux plus, ce dernier etant porteur du gene de la cp-gcmv (proteine capsidiale du grape chrome mosaic virus, un autre nepovirus de la vigne). La presence des genes du pri et du t-dna des plasmides binaires dans les clones racinaires co-transformes obtenus a ete verifiee par divers tests: detection des opines, pcr (polymerase chain reaction) appliquee aux genes gus, npt et cp-gcmv et par southern blot. Les transgenes s'expriment et induisent l'apparition des caracteres attendus: phenotype hairy root, resistance a l'hygromycine et a la kanamycine, production de beta-glucuronidase et de cp-gcmv. Les resultats des co-cultures d'a. Tumefaciens lba quatre mille quatre cent quatre pkvhg deux plus avec des embryons somatiques differencies ou des cals embryogenes ont montre que seuls ces derniers permettaient l'obtention de tissus uniformement transformes a partir desquels la regeneration de plantes transgeniques non chimeriques etait possible. Les caracteres dus a l'integration des transgenes sont exprimes des les premiers stades du developpement embryonnaire et consistent en la production, par les plantes cultivees en serre, de la cp-gcmv


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  • Annexes : 374 REF.

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