Etude d'une activite de greffage d'amines et de reticulation de proteines, presente dans les meristemes de pois (pisum sativum l. )

Study of an amine-binding and protein reticulation activity, located in pea meristems (pisum sativum l. )

• Auteur / Autrice : NARILEUSA CHIARELLO
• Direction : Jacques Guéguen
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Nantes

Résumé

L'activite de greffage d'amines, mise en evidence recemment dans le regne vegetale, a ete attribuee a la presence d'acyl transferases du type transglutaminases (tgase e. C. 2. 3. 3. 13). Ces enzymes, etudiees surtout chez les animaux (foie de cobaye et facteur xiii de la coagulation du sang) catalysent, en plus de la reaction de greffage, la reticulation et la desamidation de proteines. Plusieurs travaux experimentaux ont deja demontre leurs potentialites pour modifier des proteines d'interet technologique. Le potentiel des enzymes vegetales n'a pas encore ete exploite. Dans la premiere partie de la presente etude, une activite de greffage d'amines a ete mise en evidence dans les meristemes de pois, obtenus apres germination des graines en absence de lumiere. Cette activite, soluble dans le cytosol, est due a une proteine de masse moleculaire apparente de 150 kd, composee de deux polypeptides relies par pont disulfure. Contrairement aux enzymes d'origine animale, l'enzyme de pois ne presente pas de groupement sulfhydryle dans son site actif et n'est pas dependante du calcium mais du cuivre. Cette enzyme catalyse la reaction de greffage sur plusieurs substrats proteiques, globulaires ou non globulaires. Par rapport au substrat amine, elle agit plutot sur les diamines putrescine et cadaverine. Si les diamines sont ajoutees a la reaction, l'enzyme catalyse la reticulation des proteines. Par contre, en absence d'amines, elle n'est capable ni de desamider ni de reticuler les proteines. Aucune liaison gamma-(glutamyl)lysine ou gamma-(glutamyl)putrescine, typiques de l'action des tgases, n'a ete mise en evidence dans les produits de la reaction de reticulation catalysee par l'enzyme vegetale. Cela signifie que l'activite de greffage d'amines n'est pas due a une activite transglutaminasique. Dans la deuxieme partie de la presente etude, et pour la premiere fois, l'activite enzymatique presente dans les meristemes de pois et responsable du greffage d'amines et de la reticulation de proteines, a ete identifiee comme etant de type diamino oxydase (dao; diamine: o2 oxydoreductase desaminante; e. C. 1. 4. 3. 6). Apparemment, les reactions de greffage et de reticulation se realisent en deux etapes: une premiere, enzymatique, catalysee par la dao, qui conduit a la formation d'aldehydes intermediaires a partir des diamines; et une deuxieme, chimique, dans laquelle les aldehydes se conjuguent aux sites nucleophiles des proteines, a l'aide d'une catalyse par les ions cuivre