Analyse structurale et fonctionnelle du régulateur transcriptionnel FruR chez Escherichia coli

par Marie Scarabel

Thèse de doctorat en Sciences. Biochimie

Sous la direction de Alain-Jean Cozzone.

Soutenue en 1994

à Lyon 1 .

Le président du jury était Alain-Jean Cozzone.


  • Résumé

    L'expression du gene acek, porte par l'operon acetate et codant l'idh-kinase/phosphatase, ainsi que sa regulation par le regulateur transcriptionnel frur ont ete etudiees chez la bacterie escherichia coli. Le gene acek a ete clone dans le vecteur d'expression pqe-30 afin de surproduire une proteine fusionnee a 6 residus histidines a son extremite n-terminale. La proteine recombinante a ete purifiee a homogeneite en une seule etape par chromatographie d'affinite sur colonne de nickel-agarose. Le site de fixation de l'atp de cette proteine, presentant des proprietes catalytiques similaires a la proteine sauvage, a ete localise au niveau d'une region contenant la lysine universellement conservee chez les serine- et threonine-kinases. En vue d'une fonctionnelle de l'operon acetate, les interactions de la proteine frur purifiee ont ete caracterisees par diverses techniques de modification enzymatique et chimique du dna (empreintes a la dnase i, methylation des guanines par le dimethylsulfate, hydroxylation, depurinisation, depyrimidinisation et substitution par le desoxyuracile). Ces experiences ont permis de localiser le site de fixation de frur a environ 170 paires de bases par rapport au debut du rna messager des genes acebak et ont montre que frur interagit essentiellement avec le demi-site droit de son operateur. La fixation de frur au niveau de regions regulatrices d'autres genes controles par cet effecteur transcriptionnel, tels que les genes frub(mh)ka, ppsa, ptshlcrr et icd, a permis de definir la sequence consensus de l'operateur de frur: 5'-t-aa-c/gattcagc3'. Cet operateur presente une forte degenerescence sur son demi-site gauche validant le modele d'une interaction asymetrique avec frur. Par ailleurs, il apparait que la proteine frur est organisee en 2 domaines distincts: une region n-terminale (residus 1 a 60) responsable de sa fixation sur le dna et un domaine c-terminal (residus 61 a 334) implique dans l'oligomerisation des monomeres et la fixation de l'inducteur. Le domaine n-terminal a ete surproduit, purifie a homogeneite et sa structure tridimensionnelle a ete determinee par modelisation sous contraintes rmn

  • Titre traduit

    Structural and fonctional characterization of the transcriptional regulatory protein, frur, from escherichia coli


  • Pas de résumé disponible.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 1 vol. (158 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 147-158

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
  • Disponible pour le PEB
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.