Analyse génétique et biochimique du système Tol impliqué dans l'importation de macromolécules et le maintien de l'intégrité de l'enveloppe chez Escherichia coli K-12

par Anne Vianney

Thèse de doctorat en Sciences. Microbiologie moléculaire

Sous la direction de Raymond Portalier.

Soutenue en 1994

à Lyon 1 .

Le président du jury était Raymond Portalier.


  • Résumé

    La membrane externe des bacteries a gram negatif comme escherichia coli forme une barriere de permeabilite face au milieu exterieur. Le systeme tol permet l'importation de certaines macromolecules comme les colicines du groupe a et l'adn de phages filamenteux, et participe au maintien de l'integrite de l'enveloppe. En effet, des mutations affectant le cluster tol/pal (16,5 mn) sont associees a un phenotype de resistance aux colicines et aux phages ainsi que de liberation de proteines periplasmiques dans le milieu de culture, et a une sensibilite accrue a certaines drogues. Ce cluster code pour les proteines tolq, tolr et tola associees a la membrane interne, pour la proteine tolb periplasmique et pour une lipoproteine de la membrane externe associee au peptidoglycane, pal. 11 mutations chromosomiques affectant le systeme tol ont ete clonees et sequencees. 14 nouvelles mutations ont egalement ete obtenues apres mutagenese semi-dirigee des genes tol plasmidiques. Leurs caracteristiques fournissent des donnees preliminaires sur les sites fonctionnels des proteines tol. Par ailleurs, un nouveau cadre de lecture, orf2, a ete identifie en aval du cluster tol/pal. Les produits de ce cluster ont ete analyses apres leur marquage specifique. Les mutations etudiees n'entrainent pas de modification de la stabilite ou de la compartimentation de la proteine concernee. Une mutation de la sequence de shine-dalgarno du gene tolq, tolq890, conduit a une diminution de la synthese de tolq qui a un effet polaire posttranscriptionnel sur l'expression de tolr. En collaboration avec une equipe americaine nous avons etabli la topologie des proteines tolq et tolr. Tolq possede trois fragments transmembranaires et son extremite n-terminale est localisee dans le periplasme. Tolr est ancree a la membrane interne par son extremite n-terminale tandis que le reste de la proteine reside dans le periplasme. Des mutations suppresseurs de la mutation tolq925 affectant le troisieme segment transmembranaire de tolq ont ete recherchees dans le gene tolr. 4 mutations suppresseurs localisees dans le segment transmembranaire de tolr et une mutation concernant son extremite c-terminale ont ainsi ete identifiees. Une mutation suppresseur intragenique a egalement ete caracterisee dans le premier segment transmembranaire de tolq. Ces resultats suggerent l'existence d'une interaction directe ou non entre tolq et tolr

  • Titre traduit

    Genetic and biochemical analysis of tol system required for the uptake of macromolecules and cell envelope integrity in escheirchia coli k-12


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  • Détails : 1 vol. (159 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 142-153

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