Purification et caractérisation fonctionnelle du domaine de fixation au ligand du récepteur alpha de l'acide rétinoïque : Mise en évidence de l'implication de cystéines dnas l'interaction ligand-récepteur

par Nathalie Dallery

Thèse de doctorat en Sciences de la vie et de la santé

Sous la direction de Pierre Formstecher.

Soutenue en 1994

à Lille 1 .


  • Résumé

    Les retinoides, derives actifs de la vitamine a, jouent un role important de controle de la differenciation et de la proliferation cellulaires. L'un de ces derives, l'acide retinoique tout-trans, suscite un tres grand interet car il est implique dans la morphogenese et est propose pour la chimioprevention et le traitement de certains cancers. Le mecanisme d'action des retinoides met en jeu des recepteurs nucleaires (rar alpha, beta et gamma) appartenant a la superfamille des recepteurs steroidiens/thyroidiens. La comprehension du mecanisme moleculaire d'action des retinoides et la synthese de derives agonistes ou antagonistes specifiques d'un recepteur necessitent de bien connaitre le domaine de fixation au ligand des rar. La surexpression du domaine e de rar alpha, sous forme de proteine de fusion, dans un systeme bacterien nous a permis de proceder a sa purification et a sa caracterisation biochimique. La proteine recombinante est purifiee avec une activite specifique de 100 pmol/mg et un rendement de purification de 10%. La constante de dissociation mesuree, apres optimisation des conditions d'etude de l'interaction recepteur-ligand, est de 3,1 nm pour l'acide retinoique tout-trans, et 1,8 nm pour un derive de synthese, le cd367. Les reactifs specifiques des cysteines et des arginines provoquent une diminution de l'activite de liaison de rar alpha. Le ligand protege tres bien le site actif vis-a-vis de l'effet des reactifs des thiols. Cette protection est moins efficace en presence des reactifs des arginines. Ces observations suggerent que des residus cysteines et arginines sont localises dans le site actif du domaine e de rar alpha et participent a l'interaction recepteur-ligand. La caracterisation des cysteines situees dans, ou a proximite, du site actif a ete abordee par une approche indirecte qui utilise la spectrometrie de masse en mode electrospray. Nous presentons ici des resultats preliminaires de la premiere etape de notre etude qui consiste en l'analyse, en spectrometrie de masse, des peptides obtenus apres coupure chimique du domaine e de rar alpha.


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  • Détails : 1 vol. (194 p.)
  • Annexes : Bibliogr.

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  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 50376-1994-286
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