Études cinétiques et physiologiques d'une souche d'Escherichia coli recombinée surproductrice de glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase

par Anne Gschaedler

Thèse de doctorat en Biotechnologies et industries alimentaires

Sous la direction de Joseph Boudrant.

Soutenue en 1994

à Vandoeuvre-les-Nancy, INPL , en partenariat avec Laboratoire des sciences du génie chimique (Nancy) (laboratoire) .

Le président du jury était Jean-Marc Engasser.

Les rapporteurs étaient Bernard Ehresmann, Henri Petitdemange.


  • Résumé

    L’objectif général de ce travail est l'étude du comportement en fermenteur d'une souche d'E. Coli recombinée surproductrice d'une enzyme homologue, la glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase. Dans une première partie, les performances de la souche ont été testées en culture discontinue et semi-continue en fermenteur de 2 litres. Une concentration optimum de glucose pour l'expression de l'enzyme et l'action inhibitrice de l'acétate ont été mis en évidence. Dans une deuxième partie, un milieu simplifié riche en acides aminés a été utilisé. Une étude de l'utilisation de ces derniers a été réalisée en culture discontinue et continue. Les transporteurs des différents acides aminés semblent jouer un grand rôle dans leur mode d'utilisation. Les acides aminés ont été classés en plusieurs catégories et l'influence du glucose sur leur importation a été dégagée. En utilisant ce même milieu de culture nous avons montré qu'il était possible d'augmenter fortement et de façon transitoire la production de l'enzyme recombinante par des ajouts pulsés, soit de glucose, soit de serine. Ce phénomène a été étudié en détail et en particulier la transcription et l'utilisation des promoteurs. La quatrième partie est consacrée à l'étude de la stabilité plasmidique. Nous avons mis en évidence une instabilité plasmidique transitoire en culture discontinue. En culture continue, la stabilité est meilleure à de faibles taux de dilution. Enfin, dans une dernière partie, nous avons étudié l'influence du plasmide et de la production de la protéine recombinante sur le comportement de la souche hôte en culture discontinue, semi-continue et continue

  • Titre traduit

    Kinetic and physiologic studies of a recombinant E. Coli strain overproducing glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase


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Informations

  • Détails : 1 vol. (238 p.)
  • Annexes : 214 réf.

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