Mesure de lesions de type oxydatif de l'adn dans les fluides biologiques et dans l'adn isole

par M.-FRANCOISE INCARDONA

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de J. CADET.

Soutenue en 1994

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    Divers facteurs (stress oxydant, exposition a divers rayonnements) peuvent engendrer des modifications des bases de l'adn. La mise au point de methodes d'analyse suffisamment fiables et sensibles nous a permis de detecter et de doser plusieurs dommages oxydatifs dans un fluide biologique (urine humaine) et dans l'adn isole. Pour cela, deux techniques ont ete respectivement mises en uvre: la chromatographie gazeuse couplee a la spectrometrie de masse (cg/sm) et la chromatographie liquide a haute performance associee a une detection electrochimique (clhp/ec). La mise au point de methodes de detection de dommages oxydatifs dans l'urine par cg/sm a ete appliquee a la 5-hydroxymethyluracile, la 5-hydroxyuracile et a leurs nucleosides. Ce travail a implique, la synthese d'etalons internes enrichis isotopiquement (#2h, #1#5n, #1#8o) pour une mesure quantitative des lesions, la mise au point de la technique d'extraction du defaut et enfin l'optimisation des parametres de cg/sm pour l'obtention d'une reponse optimale. Un deuxieme volet du travail a concerne le developpement d'une nouvelle methode d'analyse de bases modifiees utilisant une colonne chromatographique a phase normale (nh#2) couplee a un detecteur electrochimique. Celle-ci nous a permis de detecter plusieurs molecules hydrophiles (5-hydroxyuracile, 5-hydroxycytosine, 2,6-diamino-4-hydroxy-5-formamidopyrimidine et 4,6-diamino-5-formamidopyrimidine) jusqu'a present difficiles a mesurer dans les conditions usuelles (colonne c18). Nous avons applique cet outil a la recherche et au dosage de la 5-hydroxyuracile et de la 5-hydroxycytosine dans l'adn soumis a deux conditions de stress oxydant (radiations ionisantes et photooxydation sensibilisee). La recherche de ces bases oxydees dans l'adn a ete facilitee par une nouvelle methode d'hydrolyse


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  • Détails : 216 P.
  • Annexes : 190 REF.

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