Endocytose de phase-fluide chez l'amibe dictyostelium discoideu. Caracterisation cinetique du trafic vesiculaire et etude de l'acidification des compartiments

par LAURENCE AUBRY

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de G. KLEIN.

Soutenue en 1994

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    L'etude du trafic endocytaire chez l'amibe dictyostelium discoideum a ete realisee a l'aide du fitc-dextran comme marqueur de phase-fluide et sonde de ph. L'evolution du ph endocytaire suit une cinetique biphasique avec une phase precoce d'acidification depuis le ph du milieu exterieur jusqu'a ph 4,5-5,0 suivie d'une remontee plus lente jusqu'a un ph stable de 6,0-6,2. L'etape d'acidification, sensible a la bafilomycine, est particulierement attenuee chez des mutants affectes dans le fonctionnement de l'h#+-atpase vacuolaire. Contrairement a ce que l'on observe chez les eucaryotes superieurs, le materiel internalise n'est pas recycle lors des phases precoces de l'endocytose mais seulement a partir d'un compartiment terminal au contenu en enzymes lysosomales reduit. Ces resultats ont ete utilises pour modeliser la dynamique endocytaire chez l'amibe dictyostelium. L'implication du reseau microtubulaire dans le trafic endocytaire a ete abordee a l'aide d'agents de depolymerisation des microtubules. Le nocodazole et le thiabendazole induisent une inhibition partielle de l'endocytose et sont sans effet sur le trafic et le ph endocytaire. Les microtubules interviendraient dans les phases precoces de l'endocytose et/ou dans l'etape d'exocytose proprement dite. L'effet differentiel du nocodazole et du thiabendazole sur l'activite endocytaire en milieu nutritif et en milieu non-nutritif suggere la participation de deux circuits distincts dans l'internalisation du fluide extracellulaire. Le cipc et le tubulozole-c induisent une inhibition totale de l'endocytose et un ralentissement du trafic post-lysosomal. Ces effets supplementaires peuvent s'expliquer par une depolymerisation partielle du reseau d'actine. Les microfilaments participeraient a la formation des vesicules d'endocytose et au transport du materiel via les differents compartiments endocytaires. La cafeine, le vanadate et la cycloheximide, tous inhibiteurs de la pinocytose chez l'amibe dictyostelium, se sont reveles avoir des effets multiples sur le trafic et le ph des vesicules d'endocytose


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  • Annexes : 247 REF.

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