Purification et etude de la mgdg synthase de l'enveloppe des chloroplastes d'epinard

par ERIC MARECHAL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de MARYSE BLOCK.

Soutenue en 1994

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    Le travail effectue dans le cadre de cette these est une contribution a la connaissance de l'udp-galactose : 1,2-sn-diacylglycerol galactosyltransferase (ec 2. 4. 1. 46), appelee aussi mgdg synthase, une enzyme qui est responsable de la synthese du monogalactosyldiacylglycerol (le lipide majeur de l'enveloppe des chloroplastes). Dans un premier temps (chapitre 1), cette enzyme a ete purifiee. Une fraction enrichie en enveloppe de chloroplastes de feuilles d'epinard est solubilisee par un detergent (le chaps). Cette fraction solubilisee est ensuite enrichie en activite de mgdg synthase par chromatographie sur colonne d'hydroxyapatite-agarose, biogel-p6dg, bleu-dextran-agarose, et chelating sepharose chargee avec du zinc. La proteine purifiee est visualisee par electrophorese sur gel de polyacrylamide, et possede un poids moleculaire apparent de 19 kda. Ce poids moleculaire est confirme par radiomarquage avec un reactif des lysines : la mgdg synthase est reperee car elle est protegee du radiomarquage par son substrat. Le second chapitre presente l'etude cinetique de l'enzyme. La mgdg synthase suit le modele de dilution de surface. Son mecanisme bireactionnel, relativement a ses deux substrats (udp-gal et diacylglycerol) est sequentiel et non ordonne. La specificite de l'enzyme par rapport a son substrat 1,2-sn-diacylglycerol est la plus forte pour le dilinoleoylglycerol. Le troisieme chapitre est une etude biochimique du site catalytique de l'enzyme. Deux sites de fixation distincts existent pour les deux substrats. Le site de fixation de l'udp-gal est masque par des reactifs des lysines (anhydride citraconique), le site de fixation du 1,2-diacylglycerol contient aussi des lysines, ainsi que des cysteines reduites et un metal (probablement du zinc).


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  • Détails : 158 P.
  • Annexes : 214 REF.

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