Etude biochimique et moleculaire, et conditions de synthese d'une endoglucanase de fibrobacter succinogenes s85

par Véronique Broussolle

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Gérard Fonty.

Soutenue en 1994

à Clermont-Ferrand 2 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Fibrobacter succinogenes, principale espece bacterienne cellulolytique du rumen, possede un systeme hydrolytique tres complexe, dont l'organisation n'est pas encore elucidee. Un gene issu de la souche s85 et clone chez escherichia coli, code pour une activite carboxymethylcellulase. La proteine codee, appelee egb, est specifiquement une beta-1,4-endoglucanase de 58kda dont les caracteristiques enzymatiques etudiees sont proches de celles de l'endoglucanase eg1 purifiee par d'autres auteurs a partir de la meme souche. La sequence nucleotidique du gene endb a ete determinee. La sequence peptidique deduite de egb montre des homologies avec celle des cellulases de la famille e et plus particulierement de la sous-famille e1. Des predictions de structures secondaires revelent qu'elle possede, comme les autres enzymes de cette sous-famille, un domaine catalytique compose de 12 helices alpha ainsi qu'un domaine en feuillets beta de fonction inconnue. Egb ne montre pas de capacite de fixation a la cellulose et ne possede pas dans sa sequence de domaine de liaison a ce substrat. Huit serums ont ete produits chez le lapin contre quatre peptides correspondant a des regions supposees accessibles dans la proteine egb. Un serum reconnait specifiquement et sensiblement l'enzyme sous forme native et denaturee lorsqu'elle est exprimee par e. Coli, et a permis sa purification par immuno-affinite a partir du periplasme de cette souche. Ce meme serum reconnait egalement en western-blot quatre bandes proteiques dans des extraits de f. Succinogenes et plus specifiquement une proteine de masse moleculaire proche de celle de egb. Le meme profil proteique est revele dans des extraits cellulaires de f. Succinogenes cultive sur sucres ou polysaccharides, suggerant que la synthese de egb est de nature constitutive. Deux proteines ont par ailleurs ete purifiees par immuno-affinite a partir du surnageant d'une culture de f. Succinogenes sur avicel et les conditions de quantification de egb a l'aide des anticorps mises au point en dot-blot

  • Titre traduit

    Biochemical and molecular study, and conditions of synthesis of a fibrobacter succinogenes s85 endoglucanase


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  • Détails : 170 P.
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