Electrotransformation et conjugaison des pediocoques. Analyse moleculaire du plasmide pucl287 de tetragenococcus halophila (pediococcus halophilus) atcc33315

par ABDELLAH BENACHOUR

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Georges Novel.

Soutenue en 1994

à Caen .

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  • Résumé

    Des essais de transformation ont permis d demontrer que les souches d'au moins deux especes de pediocoques (p. Acidilactici et p. Pentosaceus) peuvent etre transformees par electroporation. Par contre, les souches de p. Halophilus (reclasse dans un nouveau genre tetragenococcus sous la denomination tc. Halophila) s'averent refractaires a une telle transformation. Cependant la conjugaison grace au plasmide pva797 a permis de demontrer le transfert de materiel genetique chez cette espece. L'analyse moleculaire du plasmide unique pucl287 de la souche p. Halophilus atcc33315 a ete realisee. L'integralite de sa sequence nucleotidique (8738 pb) a ete determinee et revele l'existence de six cadres ouverts de lecture orientes dans le meme sens. Quatre d'entre-eux (orf2, orf3, orf4 et orf5) sont apparemment organises en operon. Le replicon minimum du pucl287 a pu etre isole par selection positive dans la souche de enterococcus faecalis jh2-2. Il est constitue de l'origine de replication portant quatre motifs de 11 pb et quatre iterons et demi de 22 pb adjacents a un promoteur suivi de l'orf2 codant pour la proteine de replication (repa287). La presence de l'orf3 qui chevauche l'orf2 sur 8 pb et qui code pour une proteine (repb287) se traduit par une diminution du nombre de copies et par une alteration de la stabilite segregationnelle du plasmide. L'analyse des intermediaires de replication du pucl287 a permis de conclure a un mode de replication de type theta bidirectionnel chez p. Halophilus. Une sonde specifique correspondant au replicon minimum du pucl287 hybride avec quelques plasmides appartenant a des souches bacteriennes des genres pediococcus, lactobacillus, leuconostoc et lactococcus


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Informations

  • Détails : 165 P.
  • Annexes : 215 REF.

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