Identification, isolement, clonage et sequencage du gene codant pour le facteur sigma majeur de lactococcus lactis subsp. Lactis ncdo 763 (ml3)

par XAVIER GANSEL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Yanick Auffray.

Soutenue en 1994

à Caen .

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  • Résumé

    Une proteine reagissant avec un anticorps dirige contre le facteur sigma majeur de bacillus subtilis (sigma 43) a ete mise en evidence chez lactococcus lactis subsp. Lactis ncdo 763 (ml3). Une strategie basee sur la synthese in vitro d'adn par reaction de polymerisation en chaine (p. C. R. ) nous a permis d'amplifier une portion interne du gene rpod codant pour le facteur sigma majeur chez cette bacterie. L'utilisation de ce fragment comme sonde moleculaire a ensuite rendu possible le clonage puis le sequencage de ce gene. Celui-ci code pour une proteine d'une masse moleculaire de 38872 da et d'un pi de 4,7. La comparaison de sa sequence en acides amines avec celle d'autres facteurs sigma majeurs bacteriens permet de confirmer l'identite du gene isole. Par hybridation moleculaire utilisant le fragment d'adn synthetise par p. C. R. , nous avons egalement pu deceler la presence de signaux avec l'adn d'autres bacteries lactiques, permettant d'avancer l'hypothese de l'existence de facteurs sigma homologues chez ces eubacteries. L'analyse de la sequence totale de l'insert clone a permis d'identifier en aval du gene rpod la partie proximale d'un cadre ouvert de lecture dont le produit presente une certaine homologie avec le transporteur des hexoses 6-phosphate et du glycerol 3-phosphate d'escherichia coli et de bacillus subtilis


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Informations

  • Détails : 140 P.
  • Annexes : 186 REF.

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