Caracterisation et production d'anticorps monoclonaux humains anti-plaquettaires

par Jeanny Laroche-Traineau

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et médicales

Sous la direction de Alan T. Nurden.

Soutenue en 1994

à Bordeaux 2 .


  • Résumé

    Les pathologies de l'hémostase nous enseignent la nécessité de l'intégrité fonctionnelle des récepteurs plaquettaires. L'absence ou l'altération des complexes GPIIb-IIIa chez les patients atteints de thrombasthénie de Glanzmann antraîne un défaut d'agrégation. Cette constatation clinique a permis d'envisager le traitement des épisodes thrombotiques par les anticorps monoclonaux humains dirigés contre le complexe GPIIb-IIIa et inhibiteurs de la fonction d'agrégation en bloquant l'interaction du complexe GPIIb-IIIa avec les protéines adhésives. Notre objectif a été la production "in vitro" d'AcM humains spécifiques du complexe IIb-IIIa, à partir de lymphocytes B de patients immunisés contre ce complexe. Dans ce but, un "screening" des sérums des patients atteints de purpura thrombopénique ou de thrombasthénie de Glanzmann a été réalisé par la technique du MAIPA "Monoclonal antibody-immobilization of platelet antigens". Nous nous sommes ensuite attachés à immortaliser les lymphocytes B sécréteurs des patients immunisés ; les techniques utilisées ont été l'infection par ABV (virus d'Epstein Barr) et la stimulation "in vitro" des lymphocytes B, suivie d'une fusion avec un myélome. Cette dernière a permis l'obtention de certains clones sécréteurs. Nous avons également réalisé une étude approfondie sur le cas d'une patiente (C. V. ) atteinte de purpura thrombopénique idiopathique. La présence dans son sérum d'anticorps anti-idiotypiques de type public a été mis en évidence. Enfin, au cours d'un de nos protocoles d'immortalisation des lymphocytes par EBV, nous avons obtenu un clone stable sécrétant un anticorps monoclonal humain anti-myosine plaquettaire. Cet anticorps se fixe également sur la myosine cardiaque. La caractérisation de l'affinité des fragments Fab sur la myosine de coeur humain nous permet de proposer l'utilisation de cet anticorps en immunoscintigraphie pour la détection de la nécrose des myocytes dans le diagnostic des infarctus du myocarde et le suivi des transplantés cardiaques.


  • Résumé

    Disorders of primary haemostasis highlight the need to detail the function of platelet receptors. Qualitative or quantitative abnormalities of GP IIb-IIIa in patients with Glanzmann's Thrombasthenia (QT) manifest in platelet aggregationabnormalities. The thrombasthenic state has shed light on possible therapeutic manoeuvres in the treatment of thrombotic states. Human monoclonal antibodies directed against the GP IIb-IIIa complex are capable of inhibiting aggregation by blocking interaction of this complex with adhesive proteins. Our aim was to produce "in vitro" human monoclonal specific for GP IIb-IIIa and capable of inhibiting aggregation, from the B lymphocytes of patients producing antibodies against this complex. Sera of patients with thrombocytopenic purpura or GT were screened using the MAIPA technique (Monoclonal Antibody-Immobilization of Platelet Antigens). We then attempted to immortalize the B lymphocytes of these immunised patients ; we achieved this with the use of EBV infecion and stimulation of B lymphocytes, followed by fusion with a myeloma cell line. In the course of our experiments, we performed detailed study of one patient (C. V. ) with ITP. The presence in her serum of an anti-idiotypic antibody against a public epitope was proven. In another patient immortalization of B lymphocytes produced a stable clone which produced an antibody recognising platelet myosin. This antibody fixed strongly to cardiac myosin also. Characterization of the affinity of Fab fragments for human heart myosin and the evaluation by immunoscintigraphy for detection of cardiac myocyte death may permit the use of this antibody in the clinical scenarios of diagnosing of myocardial infarction and surveillance following cardiac transplantation.

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  • Détails : 206 f

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  • Bibliothèque : Université de Bordeaux. Direction de la Documentation. Bibliothèque des Sciences du Vivant et de la Santé.
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  • Cote : CMTB 1994-317
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 3265
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : BIUM Bordeaux 1994
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