Uniquement les thèses soutenues
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Thèse de doctorat en Sciences biologiques et médicales
Sous la direction de Jean Mironneau.
Soutenue en 1994
à Bordeaux 2 .
mots clésLa noradrénaline, neuromédiateur sympathique, induit la contraction du myocyte lisse de veine porte de rat en activant les récepteurs alpha-1A- et alpha-2A - adrénergiques. Les mesures de variations de la concentration calcique intracellulaire, par sondes fluorescentes, et de la production d'inositols phosphates, nous ont permis de caractériser la voie de transduction reliant l'activation des récepteurs alpha-1-A-adrénergiques à la libération du Ca2+ stocké dans les compartiments intracellulaires. Cette voie active, par l'intermédiaire de la sous-unité alpha des protéines Gq ou G11, une phospholipase C qui hydrolyse les phosphatidylinositols membranaires produisant de l'inositol 1, 4, 5-triphosphate (IP3) et du diacylglycérol (DAG). L'IP3 est responsable de la libération du Ca2+ stocké. La stimulation des canaux calciques potentiel-dépendants (enregistrés par la méthode du patch-clamp) peut être déclenchée par l'activation des récepteurs alpha-1A-adrénergiques et la voie de transduction précédemment citée. Dans ce cas, le DAG agit en activant la protéine kinase C. Cependant, la stimulation des canaux calciques ar la noradrénaline est essentiellement produite par les récepteurs alpha-2A-adrénergiques. La stimulation des canaux calciques par les récepteurs alpha-2A-adrénergiques est indépendante de l'hydrolyse des pphosphatidylinositols et met en jeu une protéine Gi. Les stimulations alpha-1A- et alpha-2A-adrénergiques aboutissent à un effecteur commun : la protéine kinase C. L'activation des récepteurs alpoha-2A-adrénergiques sur des myocytes au potentiel de membrane de repos produit des réponses calciques et électrophysiologiques lentes, durables et de faible amplitude. Ces réponses sont reproduites par l'activation directe des protéines Gi par le mastoparan ; elles correspondent à l'ouverture des canaux calciques potentiel-dépendants et dépendent de l'activation de la protéine kinase C. Les études fonctionnelles montrent que les récepteurs alpha-1 et alpha-2-adrénergiques sont impliqués dans le décours de la contraction du muscle lisse de veine porte : les récepteurs alpha-1 adrénergiques sont associés à la réponse contractile rapide et transitoire alors que les récepteurs alpha-2-adrénergiques interviennent dans la contraction maintenue.
Noradrenaline induces contraction of rat portal vein myocytes by activating both alpha1A- and alpha-2A-adrenoreceptors. The transduction pathway activated by alpha-1Aadrenoreceptors has been identified by measuring both intracellular calcium concentration with fluorescent dyes and inositol phosphates generation. The alpha-1A-adrenoreceptor couples to the alpha-subunit of a Gq/G11-protein which leads to a stimulation of phospholipase C activity. The subsequent hydrolysis of phosphatidylinositides produces both inositol 1, 4, 5-triphosphate (IP3) and diacylglycerol (DAG). IP3 is responsible for calcium release from intracellular stores. Stimulation of voltage-dependent calcium channels (measured with the patch-clamp method) is produced in response to activation of alpha-1A-adrenoreceptors through the same transduction pathway. DAG acts by increasing protein kinase C activity. However, stimulation of calcium channels is mainly dependent on activation of alpha-2A-adrenoreceptors. In this case, the transduction mechanism differs strongly from the precedent one : there is no phosphatidylinositides hydrolysis and the G-protein involved belongs to the Gi-family. Both alpha-1A-and alpha-2A-adrenoreceptor-induced stimulations of calcium channels incvolve activation of protein kinase C. At the resting membrane potential, activation of alpha-2A-adrenoreceptors promotes slow and small variations in both intracellular calcium concentration and membrane current. Similar responses are obtained with mastoparan, an activator of Gi-proteins. These responses are mediated through activation of protein kinase C which phosphorylates calcium channels. Phosphorylation would be responsible for increased opening probability of calcium channels. Contractile responses of intact strips of rat portal vein stimulated by alpha-1-or alpha-2-adrenergic agonists reveal that activation of alpha-1-adrenoreceptors may be associated with fast and transient contraction whereas activation of alpha-2-adrenoreceptors is involved in maintained contraction.
