Détection de Mycoplasma hyopneumoniae chez le porc par la technique d'amplification enzymatique de gènes (PCR) : étude de l'hétérogénéité des souches de Mycoplasma hyopneumoniae

par Béatrice Blanchard

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et médicales

Sous la direction de Joseph Marie Bové.

Soutenue en 1994

à Bordeaux 2 .


  • Résumé

    L'objectif du travail présenté dans ce mémoire, a été de localiser les sites de multiplication de M. Hypopneumoniae et de rechercher les sites de prélèvements intéressants pour le diagnostic. Cette étude, réalisée en microscopie électronique, a permis de mettre en évidence le rôle prépondérant des relations entre l'épithélium trachéal et M. Pneumoniae et de mettre au point un modèle in vitro utilisant les anneaux de trachée de porc. Le second objectif du travail a été de mettre au point de nouvelles techniques de diagnostic afin d'améliorer la spécificité et la sensibilité des tests de diagnostic. La sonde d'ADN spécifique 1141 oibtenue au laboratoire permet de détexcter 3 105 organismes et de rechercher M. Pneumoniae à partir de l'ADN extrait des lavages trachéobronchiques. La sensibilité du test de détection avec la technique PCR a été augmentée de 1000 fois (4 102 organimes). Ce test permet de détecter M. Pneumoniae dans les lavages trachéobronchiques sans extraction d'ADN. Au cours de la mise en oeuvre de ce test, une hétérogénéité génomique des souches de M. Pneumoniae de référence par rappoort aux souches du terrain, a été mise en évidence. L'étude de cette hétérogénéité a permis d'identifier les gènes délétés chez les souches de référence et de connaître les protéines pour lesquelles ils codent. Ces protéines se révèlent homologues aux protéines de transport identifiées chez les bactéries tel que E. Coli.


  • Résumé

    The purpose of the present study was to visualise the relationship between M. Pneumoniae and the porcine respiratory epithelium by electron microscopy and was an attempt to develop an in vitro model for M. Hypopneumoniae using pig tracheal rings. The second purpose of the study was to look for a specific DNA probe and specific primers to be used in polymerase chain reaction experiments for the specific detection of M. Pneumoniae. We selected a specific probe designated 1141 which was abble to detect 3 105 organisms and to identify M. Pneumoniae directly in tracheobronchiolar washing of experimently infected piglets. In order to increase the sensitivity of detection, we set up a PCR assay sequenced the specific 1141 fragment and chose a pair of primers. With the PCR reaction we were able to detect 500 fg of purified DNA and to detect M. Pneumoniae in clinical material without prior DNA purification. We have applied the PCR on DNA from collections (ATCC) and field strains of M. Pneumoniae. This analysis allowed us to reveal a genetic heterogeneity among strains. Genomic rearrangement resulted in the deletion of a 2221 bp fragment on the reference J strain. This deleted fragment coded for a protein homologous to one posessing an implicated transport function.

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Informations

  • Détails : 200 f

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  • Bibliothèque : Université de Bordeaux. Direction de la Documentation. Bibliothèque des Sciences du Vivant et de la Santé.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : CMTB 1994-287
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 682
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : BIUM Bordeaux 1994
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