Caractérisation par modélisation moléculaire des paratopes de deux single-chain FV anti-cortisol produits chez Escherichia coli

par Hervé Le Calvez

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et microbiologie

Sous la direction de Daniel Baty.

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  • Résumé

    Dans le cadre de la biochimie clinique, la specificite des anticorps monoclonaux obtenus par la technique des hybridomes n'est pas suffisamment elevee pour le dosage precis d'une molecule biologique en presence de ses analogues. Afin d'eviter les reactions croisees d'un anticorps monoclonal anti-cortisol, nous devons augmenter sa specificite pour le cortisol en minimisant sa reconnaissance pour ses analogues steroidiens. Notre strategie consiste, dans un premier temps, en l'elaboration d'un vecteur d'expression plasmidique efficace pour produire dans l'espace periplasmique de escherichia coli des quantites suffisantes de fragments fv pour des etudes structurales. La production de fragment fv sous forme d'une chaine unique (single-chain fv) est elevee, mais les molecules sont inactives dans les conditions standard de culture. Nous avons optimise notre systeme a la fois pour les conditions de culture et les capacites du plasmide a exprimer des proteines correctement exportees. Dans des conditions bien definies, nous avons obtenu des fragments scfv avec une affinite equivalente a celle de l'anticorps monoclonal secrete par l'hybridome initial. Dans un deuxieme temps, nous avons obtenu des informations sur la structure tridimensionnelle des anti-cortisol pour diriger la mutagenese sur les residus amino-acides impliques dans la reconnaissance du cortisol. La construction par modelisation graphique de modeles tridimensionnels des fragments fv des deux anticorps a notre disposition nous a renseigne non seulement sur les acides amines proches de l'haptene, mais aussi sur les interactions atomiques haptene-anticorps. En effet, nous avons identifie un motif anti-steroide compose principalement de trois residus tryptophane qui agissent par stacking sur les deux faces du cortisol. Nous avons egalement montre qu'un des trois tryptophanes pouvait etre responsable de la selectivite de reconnaisance des analogues du cortisol


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Informations

  • Détails : 167 f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr.f. 135-156

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  • Bibliothèque : Université Aix-Marseille (Marseille. Luminy). Service commun de la documentation. Bibliothèque de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 23950
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