Clonage et séquençage du gène de la sphéruline (protéine majeure des corps d'inclusion à virus) de l'entomopoxvirus du coléoptère Melolontha melolontha (MmEPV) : expression de protéines sous contrôle du promoteur de la sphéruline dans des virus de la vaccine recombinants

par Patrick Sanz

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et microbiologie

Sous la direction de Max Bergoin.

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  • Résumé

    Nous avons clone et sequence le gene de la spheruline, proteine majeure des corps d'inclusion de l'entomopoxvirus de melolontha melolontha (mmepv). La sequence de la spheruline est de 2826 nt, correspondant a 942 aa. Elle renferme 46 residus cysteine vraisemblablement impliques dans des ponts disulfures intra et inter-chaines. L'extremite 5' non codante du gene, tres riche en a+t, presente de fortes homologies avec celles des promoteurs tardifs des poxvirus de vertebres. L'extremite 5' de l'arnm de la spheruline possede une sequence poly(a) d'environ 20 nt situee immediatement en amont du codon d'initiation de traduction et absente sur la molecule d'adn du virus. Ainsi, le gene de la spheruline du mmepv presente les caracteristiques essentielles d'un gene tardif de poxvirus de vertebres. La spheruline presente de fortes homologies de sequence avec les spheroidines d'entomopoxvirus des lepidopteres amsacta moorei et choristoneura biennis mais aucune homologie avec la proteine majeure des inclusions de type a de poxvirus de vertebres. Le fonctionnement du promoteur de la spheruline a ete analyse dans le systeme heterologue virus de la vaccine-cellules de mammiferes. Des virus recombinants epv-vv ont ete obtenus et purifies a partir de vecteurs de transfert vaccine (vv) dans lesquels le gene lacz, fusionne ou non a la spheruline, a ete place sous controle d'une sequence promoteur spheruline. Le fonctionnement du promoteur dans ces recombinants est de type promoteur tardif avec notamment absence d'expression de beta galactosidase en presence d'arac. Les taux d'expression correspondent a environ la moitie de ceux obtenus a partir d'un recombinant exprimant lacz sous controle du promoteur vv precoce-tardif p7. 5

  • Titre traduit

    Cloning and sequencing of the MnEPVS spherulin gene: protein expression under control of the spherulin promoter in recombinant vaccinia viruses


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Informations

  • Détails : 1 vol. ( 144 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr.: f. 123-144

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  • Bibliothèque : Université Aix-Marseille (Marseille. Luminy). Service commun de la documentation. Bibliothèque de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : L23711
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