Etudes structurales de la sous-unite b de la gyrase d'escherichia coli et de l'arn polymerase a de saccharomyces cerevisiae. Microscopie electronique et analyse d'images de cristaux bidimensionnels

par HERVE CELIA

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Pierre Oudet.

Soutenue en 1993

à Strasbourg 1 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Des cristaux bidimensionnels de sous-unite b de la gyrase avaient ete obtenus par interaction specifique de la proteine avec un film de lipides greffes covalament a la novobiocine, un inhibiteur des fonctions atpasiques de l'enzyme. Nous avons calcule un modele tridimensionnel de la sous-unite b a partir d'images de cristaux de la proteine colores negativement. Ce modele montre a 2,5-3,0 nm de resolution deux bras allonges formant une structure en v, la base du v contenant le site de liaison a la novobiocine. L'analyse d'images effectuee sur les memes cristaux hydrates congeles a permis de determiner une carte de projection de la proteine a 1,0 nm de resolution, mettant en evidence des details structuraux non resolus en coloration negative. Nous avons compare nos donnees de microscopie electronique avec la structure cristallographique d'un fragment n-terminal de la proteine contenant le site de liaison a l'atp. La localisation du fragment dans la structure de la proteine entiere suggere que les sites de liaison a l'atp et a la novobiocine sont proches l'un de l'autre. Enfin les resultats que nous avons obtenus en diffraction electronique montrent qu'une etude structurale de la proteine a haute resolution peut etre envisagee a partir des cristaux bidimensionnels. Par l'utilisation de lipides charges positivement et etales en monocouche, nous avons pu obtenir les premiers cristaux bidimensionnels d'une arn polymerase eucaryote. Le modele tridimensionnel calcule a partir des cristaux colores negativement montre a 3,0 nm de resolution une structure de forme irreguliere de 111115 nm. Cette structure est caracterisee par un sillon de 10 nm de long, et une protrusion en forme de doigt definissant un canal a l'entree du sillon. Le canal et le sillon ont les dimensions requises pour lier une molecule d'adn double brin et contiennent probablement le site catalytique de polymerisation de l'arn

  • Titre traduit

    Structural studies of the escherichia coli gyrase b subunit and of the saccharomyces cerevisiae rna polymerase a. Electron microscopy and image analysis of two-dimensional crystals


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  • Détails : 165 P.
  • Annexes : 170 REF.

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  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : microfiche
  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service des bibliothèques. Bibliothèque L'Alinéa.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : Th.Strbg.Sc.1993
  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service des bibliothèques. Bibliothèque L'Alinéa.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : H 503.000,1993
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