Application d'une nouvelle technique de transfert de genes a l'etude des regulations genetiques par l'ampc dans les neurones de la couche granulaire du cervelet de rat en culture primaire

par FABRICE BARTHEL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de PAUL FELTZ.

Soutenue en 1993

à Strasbourg 1 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Pour analyser les mecanismes des regulations transcriptionnelles qui implique la voie regulatrice dependant de l'ampc dans des neurones du snc, nous avons developpe une technique de transfert de genes basee sur l'utilisation de lipopolyamine. Au plan methodologique, nous avons montre que cette methode de transfection est applicable a des lignees cellulaires et a des neurones differencies du snc. De plus, par une etude comparative de differents milieux, nous avons montre que l'efficacite de transfection est fonction de la concentration et du nombre de charges des reactants, de la force ionique et de la presence d'ions divalents. Enfin, nous avons montre que le milieu nacl (150 mm) est le milieu de choix dans lequel doit s'effectuer la formation et la maturation du complexe, car il peut etre additionne du milieu de culture necessaire a chaque type cellulaire. Au plan physiologique, nous avons ainsi pu demontrer que, dans les grains du cervelet, l'activation des recepteurs beta adrenergique et de la crh conduit aux augmentations du taux d'ampc et de la transcription du proto-oncogene c-fos. Par l'utilisation de genes chimeres, nous avons pu etablir que l'augmentation de l'expression genetique fait suite aux activations de la pka et du facteur nucleaire creb. Ces deux effecteurs augmentent la transcription par l'intermediaire, d'au moins, trois elements regulateurs distincts. Ces elements, presents dans le promoteur du gene c-fos sont: l'element repondant a l'ampc (cre: tgacgttt), le sre (serum responsive element) et l'element fap (fosap1-like site). Enfin, nous avons montre que la voie regulatrice dependant de l'ampc est modulee par la concentration de calcium cytosolique libre. Une augmentation du calcium intracellulaire par activation des recepteurs ionotropes ou par augmentation de l'activite electrique exerce un effet stimulant sur la sequence regulatrice de type cre independamment de la pka ou du facteur nucleaire creb. Une reduction de la concentration de calcium libre potentialise les effets genomiques de la voie ampc en augmentant l'accumulation d'ampc donc de l'activite de la pka puis du facteur nucleaire creb. De ce fait, la variation de la concentration de ca#2#+ intracellulaire permet le passage d'un etat de regulation de type metabotrope (ca#2#+#i faible) a un etat de regulation mixte, metabotrope/ionotrope (ca#2#+#i eleve) ou les effets potentialisateurs du ca#2#+ traduisent l'activation de deux voies regulatrices distinctes

  • Titre traduit

    Camp-mediated gene regulation analysis ith a novel gene transfer technique in cerebellar granular neurones


  • Pas de résumé disponible.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 205 P.
  • Annexes : 214 REF.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Danièle Huet-Weiller.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : Th.Strbg.Sc.1993;1600
  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Danièle Huet-Weiller.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : H 503.000,1993
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.