Détermination de la concentration intracellulaire en ion magnésium par microfluorimétrie : vers une utilisation rationnelle du mag-indo-1 dans les cellules vivantes isolées

par Bruno Morelle

Thèse de doctorat en Biologie

Sous la direction de Jean-Marie Salmon.

Soutenue en 1993

à Perpignan .


  • Résumé

    Ce travail est consacre a l'elaboration d'un protocole de mesure de la concentration en magnesium libre dans des cellules vivantes. Les techniques de microspectrofluorimetrie et une methode d'analyse spectrale sont utilisees pour calculer cette concentration a partir du signal de fluorescence d'une sonde specifique du magnesium, le mag-indo-1. L'etude physico-chimique en solution met en evidence trois especes du mag-indo-1, une espece protonee, une espece liee au magnesium et une espece liee aux proteines, en equilibre avec l'espece deprotonee du mag-indo-1. Un modele physico-chimique des equilibres de la sonde avec ses differents ligands est propose. Cette premiere etape permet l'application de ces resultats a la mesure du magnesium libre dans des cellules vivantes. Les conditions optimales de saisie de l'information sont definies et la mesure est testee en terme de precision et de sensibilite. La mesure est ensuite realisee sur des cellules lymphoides humaines, une lignee sensible et deux lignees resistantes aux drogues cytotoxiques. Elle a permis l'etude, dans un premier temps des desequilibres de concentration en magnesium libre occasionnes par le traitement a l'adriamycine sur les cellules sensibles et dans un deuxieme temps, des variations de concentration en magnesium entre la lignee sensible et les lignees resistantes aux drogues anti-neoplasiques. La presence d'une fluorescence supplementaire observee pour de faibles concentrations intracellulaires en sonde a conduit a affiner le protocole de mesure et a definir les types d'applications de cette methode de mesure.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (111 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 99-107

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  • Bibliothèque : Université Perpignan Via Domitia. Service commun de la documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH 1993 MOR
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