Utilisation de la fluorescence résolue en temps pour l'étude des protéines : application à des neurotoxines de venin de serpent

par Patrick Blandin

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Jean-Claude Brochon.

Soutenue en 1993

à Paris 11 .


  • Résumé

    L'environnement local et la dynamique de l'unique résidu tryptophane situe dans la boucle active de l'érabutoxine a de laticauda semifasciata et de son dérive dont la lysine en position 27 a été acétylée, ont été étudiés par fluorescence statique et résolue en temps en mode polarise. Le TRP-29 de l'érabutoxine a présente, a l'instar d'autres neurotoxines étudiées, une cinétique de fluorescence simple et semble être dans un environnement protéique apolaire et très rigide. L'étude de la fluorescence du TRP-29 en fonction de la température met en évidence une transition fortement coopérative correspondant a une dénaturation localisée autour du TRP-29, avec une température de 73,20,8c, irréversible au niveau des modifications conformationnelles (exposition au solvant) et des flexibilités engendrées à l'échelle de la picoseconde et de la nanoseconde. L'étude des effets du ph sur la fluorescence du TRP-29 a permis de caractériser une dénaturation acide réversible en dessous de ph3 et suggère l'importance de l'ASP-31 et du glu-38 dans le maintien de la rigidité du site actif par les liaisons hydrogène intra-feuillets qui les relient respectivement au TRP-29 et a la TYR-25. En élevant le ph, deux transitions sont visibles entre ph9 et 10,5 et ph11 et 12. La première est imputable principalement a l'ionisation de la lys-27. L'acétylation de la lys-27 rend l'environnement local du TRP-29 plus flexible ou modifie l'orientation de ce résidu, mais seulement jusqu'en dessous de la température de dénaturation et du pk de la lys-27; aussi, la charge du résidu en position 27 (lys) semble également importante dans le maintien de la structure locale de la neurotoxine. Les distributions des durées de vie de fluorescence semblent représenter une signature spectroscopique specifique d'un groupe de protéines possédant une structure locale semblable. Peu représenté, ce tryptophane fournit alors une sonde de choix

  • Titre traduit

    Study of proteins using time-resolved fluorescence: application to snake venom neorotoxins


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Informations

  • Détails : 1 vol. (159 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p141-153

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  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Accessible pour le PEB
  • Bibliothèque : Muséum national d'histoire naturelle. Bibliothèque centrale.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : 135 479
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-011461
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