Construction d'une banque de fusions traducltionnelles chez kluyveromyces lactis : recherche de promoteurs forts et caracterisation d'un transporteur du systeme a haute affinite du glucose

par SANDRINE MENART

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Monique Bolotin-Fukuhara.

Soutenue en 1993

à Paris 11 .

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  • Résumé

    Ce travail porte sur la construction d'une banque de fusions traductionnelles avec le gene 'lacz d'e. Coli par transposition et son utilisation pour rechercher des promoteurs forts. La transformation d'une souche lac4-8 de k. Lactis incapable de croitre de lactose a permis d'isoler une centaine de plasmides exprimant une proteine de fusion en quantite suffisante pour permettre la croissance directe sur lactose. Le sequencage de la jonction de la fusion portee par ces plasmides et la comparaison de la sequence proteique deduite de la sequence nucleotidique ont permis d'identifier les produits des genes portes par la moitie de ces plasmides. La plupart des produits de ces genes sont impliques dans la glycolyse, la traduction ou le metabolisme. L'analyse transcriptionnelle montre que les genes pyca, pdca, rp28 et xyl1 sont plus fortement transcrits que le gene lac4, seul gene dont le promoteur ait ete utilise chez k. Lactis pour des etudes d'expression heterologue. Ceci suggere que les promoteurs de ces genes sont plus forts que le promoteur du gene lac4. Un vecteur d'expression a ete construit afin d'etudier fonctionnellement ces promoteurs, et l'etude par deletion des regions promotrices des genes rp28 et xyl1 a ete entreprise. La derniere partie de ce travail concerne la caracterisation d'un gene, dont l'etiquette montrait des homologies faibles, mais significatives, avec des proteines appartenant a la famille des transporteurs de sucres. La determination d'une grande partie de la structure primaire de ce gene a confirme qu'il codait pour un transporteur de sucre. Les etudes de transport du glucose entreprises dans les souches isogeniques sauvage et disruptee ont permis de montrer que ce gene, nomme hgt1, code pour un composant majeur du systeme de transport du glucose de type haute affinite


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  • Détails : 302 P.
  • Annexes : 377 REF.

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  • Accessible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-011416
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