Modalites d'installation de sclerotinia sclerotiorum (lib. ) de bary sur colza (brassica napus var. Oleifera) et caracterisation precoce de l'infection par methode immunoenzymatique

par ISABELLE JAMAUX

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Michel Dron.

Soutenue en 1993

à Paris 11 .

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  • Résumé

    La mise au point d'un modele de prevision du risque d'attaque de sclerotinia sclerotiorum sur colza est necessaire afin de mettre en uvre une lutte raisonnee avec des traitements chimiques efficaces. La determination et la detection precoce des premiers stades du processus infectieux, objectifs de ce travail, sont une contribution a la mise au point d'un tel modele. Deux themes majeurs ont ete developpes: le premier vise a mieux connaitre les modalites d'installation de s. Sclerotiorum sur colza par une etude en microscopie electronique a balayage. Les observations ont ete effectuees a la suite de contaminations artificielles de jeunes petales et de disques foliaires, isoles ou superposes (petale sur feuille), par des ascospores, inoculum primaire en conditions naturelles. Sur jeunes petales isoles, les etapes typiques de la pathogenese ont ete observees: adhesion des ascospores et germination, effondrement, penetration des cellules epidermiques de l'hote et colonisation du petale. A l'inverse, sur feuilles isolees, aucune ascospore en germination n'a ete observee. Lorsque petale et disque foliaire sont superposes, les ascospores germent uniquement sur le petale. Puis le mycelium, apres avoir colonise ce petale, devient une source d'inoculum pour la feuille. Ces observations confirment l'importance d'une etape d'infection prealable des petales dans le deroulement de la maladie. Le second theme a trait a la caracterisation serologique de s. Sclerotiorum sur petale, en vue de l'elaboration d'un test de detection sensible et specifique de cette espece. Des serums polyclonaux anti-ascospores et anti-mycelium ont ete testes par la methode acp-elisa vis-a-vis du mycelium et des ascospores. La limite de detection des ascospores avec les serums s'est averee trop elevee pour une eventuelle detection de la pollution des petales par quelques ascospores. Cependant, la grande sensibilite du test obtenue avec le serum anti-mycelium vis-a-vis du mycelium permet d'envisager l'utilisation d'un tel type de serum pour detecter le mycelium sur petale dans les premiers stades du processus infectieux. Toutefois, les serums polyclonaux diriges contre les extraits myceliens bruts solubles de s. Sclerotiorum generent des reactions croisees avec botrytis cinerea, susceptible, lui aussi, d'etre present sur petale de colza. Afin d'obtenir des reactions plus specifiques, des serums de deuxieme generation ont ete diriges contre des extraits myceliens solubles de s. Sclerotiorum purifies. Ces immunogenes ont ete obtenus par absorption, en un ou deux cycles successifs, des antigenes de s. Sclerotiorum communs avec ceux de b. Cinerea, avec un serum polyclonal anti-b. Cinerea. Apres deux cycles, l'immunogene a permis de produire un serum qui distingue nettement s. Sclerotiorum de b. Cinerea. La sensibilite du test das-elisa avec ce serum a ensuite ete amelioree par l'utilisation d'un systeme d'amplification (biotine-streptavidine) de la reponse elisa. In planta, malgre quelques reactions residuelles non specifiques, ce serum differencie les infections causees par les deux champignons. Des analyse qualitatives, par immunotransfert, ont permis de mettre en evidence, avec le serum de deuxieme generation, une bande proteique d'environ 46 kda qui pourrait etre specifique de l'espece etudiee car elle n'est pas revelee par le serum anti-b. Cinerea


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  • Détails : 140 P.
  • Annexes : 248 REF.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-011369
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