Etude moleculaire de la proteine cd8 des lymphocytes t humains, impliquee dans la liaison aux molecules de classe i du complexe majeur d'histocompatibilite

par JEAN-PHILIPPE BOURSIER

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de O. ACUTO.

Soutenue en 1993

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Afin d'etudier la structure et la fonction de la molecule cd8 humaine, nous avons exprime dans des cellules d'insecte (sf9), une molecule recombinante soluble de la region extracellulaire du cd8 homodimerique (scd8a161), constituee du domaine n-terminal de type immunoglobuline, suivi d'une region charniere de 47 acides amines. Apres adsorbtion sur une surface de plastique, cette proteine permet l'adhesion specifique de cellules b-ebv -classe i#+. Ce test semble donc interessant pour etudier le site de liaison du cd8 a la molecule de classe i, par mutagenese dirigee. Differentes mutations ont ete realisees dans le domaine n-terminal du scd8a161 ne permettent pas de voir une difference d'adhesion des cellules b-ebv aux scd8a161 mutes. Afin d'approfondir les connaissances structurales du cd8a, une autre molecule, correspondant au domaine n-terminal du cd8a (scd8a114) a ete exprimee chez e. Coli. D'autre part, le scd8a161 a ete produit dans les cellules cho (chinese hamster ovary) avec un rendement superieur a celui obtenu avec les cellules sf9. Les deux proteines solubles ont ete purifiees et caracterisees. La determination de leurs rayons de stokes et de leurs coefficients de sedimentation, a permis de montrer que la region extracellulaire entiere est tres etendue, tandis que le domaine n-terminal est globulaire. Cette conformation allongee est due a la region charniere, tres glycosylee et flexible, qui permet au cd8 d'atteindre le domaine a3 de la molecule de classe i. Des essais de liaison directe du scd8a161 (cho) a une molecule de classe i recombinante soluble, ont aussi ete realises avec le biacore, et suggerent que l'affinite du cd8 pour la molecule de classe i est tres faible (kd>10#-#5m). L'expression chez e. Coli d'une troisieme proteine recombinante, constituee par l'association des domaines n-terminaux du cd8a et du cd8b relies par un peptide jonctionnel, a ete entreprise. Cette molecule devrait permettre de mener des experiences de radiocristallographie aux rayons x pour determiner la structure tridimensionnelle du cd8 heterodimerique


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Informations

  • Détails : 170 P.
  • Annexes : 200 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Accessible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1993
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