Activite transcriptionnelle aux stades precoces de l'embryogenese : etude systematique par mutagenese de la region regulatrice du virus polyome

par PASCALE TROTOT

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de D. BLANGY.

Soutenue en 1993

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Le virus polyome constitue un modele d'organisme dont l'expression depend du reseau de facteurs transcriptionnels present dans les cellules qu'il infecte. Les cellules de carcinome embryonnaire telles que les pcc4 et les f9 qui sont representatives de stades precoces embryonnaires, ne sont pas permissives a l'infection par le virus. Tous les mutants de polyome isoles sur ces cellules presentent des remaniements dans une region du genome viral, importante pour la transcription precoce et tardive (qui a ete definie comme enhancer), ainsi que pour la replication. Afin de determiner les mecanismes moleculaires impliques dans la regulation de la transcription virale precoce dans differents types cellulaires, nous avons entrepris de caracteriser le role de chaque sous-sequence de la region enhancer de polyome. Une mutagenese systematique par deletions orientees, deletions internes, mutagenese ciblee et dirigee, a ete realisee in vitro. Les effets des differentes regions mutees sur l'activite du promoteur viral precoce place en amont d'un gene rapporteur luciferase ont ete testes apres transfection dans trois lignees de cellules permissives ou non: nih 3t3, f9 et pcc4. Des constructions utilisant des oligonucleotides portant des sites particuliers ont d'autre part ete realisees pour preciser la fonction et la localisation de certains facteurs de transcription dans chaque type cellulaire. Les resultats ont permis de mettre en evidence des regions importantes pour l'activite transcriptionnelle alors qu'aucune interaction proteique n'y avait jusqu'alors ete decrite. Ils ont permis l'identification de regions cibles d'un effet inhibiteur dans les cellules de carcinome embryonnaire et revele que ces effets masquent des effets activateurs. Ceux-ci s'exercent de maniere inattendue principalement via le site pea1/ap1 dans les f9


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Informations

  • Détails : 234 P.
  • Annexes : 245 REF.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1993
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