Localisation des sequences cis-regulatrices et identification de facteurs trans-regulateurs du gene fbp1 de d. Melanogaster

Localisation of the cis-regulatory sequences and identification of the trans-acting factors of the fbp1 gene of d. Melanogaster

• Auteur / Autrice : Pascale Lapie
• Direction : Jean-Antoine Lepesant
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

L'objectif de ce travail etait de completer l'etude de la regulation de la transcription du gene fat-body protein 1 (fbp1) de drosophila melanogaster. Ce gene est exprime specifiquement dans le corps gras des larves de troisieme stade et est inductible par l'hormone steroide de la mue, l'ecdysone. La region amont de 1,5 kb cis-regulatrice de ce gene contient un element enhancer proximal de reponse a l'ecdysone de 70 pb, les sequences distales a cet element etant responsables du niveau de transcription du gene. Afin de localiser les elements cis-regulateurs impliques dans le niveau de transcription de ce gene, j'ai utilise une approche permettant de s'affranchir des effets de position couramment rencontres dans les experiences de transgenese chez la drosophile. Cette approche a consiste a deleter, a l'aide de la transposase p, les sequences internes d'un transgene contenant la region amont de 1,5 kb du gene fbp1 fusionnee a un gene rapporteur. Elle m'a permis de localiser principalement une region distale localisee au voisinage du nucleotide -1105 regulant negativement la transcription du gene et une courte sequence de 32 pb (localisee entre les coordonnees -194 et -162) proche de l'enhancer proximal amplifiant la transcription d'au moins un facteur 5. L'identification des facteurs trans-regulateurs du gene fbp1 se fixant sur les regions ainsi identifiees a ete entreprise. J'ai mis en evidence par des experiences de retard de migration sur gel l'interaction des facteurs aef-1 et dmc/ebp presents dans le corps gras larvaire avec la region regulatrice distale du gene fbp1. Cette meme approche m'a permis de mettre en evidence la fixation d'un facteur present specifiquement dans le corps gras larvaire sur l'element amplificateur de 32 pb de ce gene et de preciser les sequences d'adn impliquees dans cette interaction. Je presenterai aussi des resultats suggerant l'interaction des produits du gene broad-complex avec l'enhancer proximal du gene fbp1