Developpement d'une methode simplifiee de cryoconservation de tissus et d'embryons somatiques vegetaux et etude de l'acquisition de la tolerance a la congelation

par HERVE TESSEREAU

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Daniel Côme.

Soutenue en 1993

à Paris 6 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Une technique simplifiee de congelation d'embryons somatiques differencies de carotte (daucus carota l. ) a ete mise au point. Les embryons sont pretraites avec du saccharose comme unique cryoprotecteur puis congeles en les placant dans un congelateur menager a 20 c, sans controle de la cinetique de refroidissement, avec transfert dans l'azote liquide. Apres decongelation, 63 a 93% des embryons (selon les souches) reprennent rapidement leur croissance bipolaire et evoluent ensuite en plantes adultes a la serre de facon similaire aux temoins. De plus, la congelation simplifiee agirait comme outil de selection des embryons de qualite car les embryons detruits au cours de protocole sont prioritairement ceux qui etaient incapables d'evoluer en plantules. Une etude de conformite a montre que le caractere de sterilite male cytoplasmique est conserve pour les plantes obtenues a partir d'embryons congeles. Les embryons peuvent etre conserves a long terme dans l'azote liquide (196 c) ou a moyen terme a 80 c. Une correlation negative a ete mise en evidence entre l'age de la souche embryogene et la tolerance des embryons a la congelation. De plus, les durees de culture a la fois en phase indifferenciee (en presence d'auxine), et en phase de differenciation (en absence d'auxine) sont impliquees dans cette tolerance. La tolerance a la congelation n'est pas strictement reliee a l'action de saccharose, d'autres sucres tels que raffinose, lactose ou maltose, et polyols comme le sorbitol sont egalement efficaces (contrairement aux cryoprotecteurs normalement utilises tels que dmso ou glycerol). L'action de ces substances est reliee a leur effet osmotique et a des mecanismes non colligatifs, faisant intervenir la nature du compose et ses proprietes physico-chimiques. Un pretraitement court de quelques minutes permet aux embryons de souches jeunes de resister a la congelation alors que 21 heures semblent necessaires pour les souches agees. Le fluridon n'inhibe pas la tolerance a la congelation, laquelle ne serait donc pas liee a une synthese endogene d'aba. Sans modification majeure, ce protocole s'est revele efficace pour la congelation de souches tissulaires de rosmarinus officinalis, de suspensions embryogenes de daucus carota, coffea canephora et c. Arabica. Cette methode permet de pallier au declin du potentiel embryogene frequemment observe lorsque les cultures sont repiquees regulierement, et s'avere etre un progres decisif pour la propagation massale par embryogenese somatique de genotypes selectionnes. Son application aux embryons somatiques de c. Canephora a conduit a des taux de survie de 100% exprimee par embryogenese secondaire. Les embryons de cette espece tropicale semblent plus sensibles a la deshydratation pendant le pretraitement que ceux de daucus carota. L'application de cette methode de conservation de germplasm a une variete de materiels et/ou d'especes semble tres prometteuse


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  • Détails : 247 P.
  • Annexes : 286 REF.

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  • Accessible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1993
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