Etude de la mutagenese induite par des sites abasiques dans les cellules de mammifere

par JANUARIO CABRAL NETO

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Alain Sarasin.

Soutenue en 1993

à Paris 6 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Le travail presente dans cette these porte principalement sur l'etude du mecanisme moleculaire de la mutagenese induite par des sites abasiques dans les cellules de mammifere. Nous avons utilise comme systeme d'etude des vecteurs navettes a adn simple ou double brin capables de se repliquer dans les cellules de mammifere ou a ete effectuee la mutagenese et dans les bacteries, ou ont ete cribles les mutants. Nous avons etabli dans la premiere partie de ce travail, le spectre des mutations provoquees par des sites abasiques induits au hasard sur le gene cible supf. Ceux-ci ont ete provoques par un traitement thermique a 70#oc en milieu acide produisant des lesions de facon aleatoire sur la cible (supf) presente dans le vecteur navette simple brin (pcf3a). Le spectre des mutations induites par des sites abasiques revele principalement des substitutions de bases dans la region qui conduira au trna mature. La mutagenese peut etre totalement aboutie par traitement du plasmide contenant des sites abasiques, soit par un tampon alcalin, soit par incubation avec une enzyme ayant une activite ap-endonucleasique, avant sa transfection dans les cellules de mammifere. Ceci montre, les sites abasiques etant alcali labiles que la mutagenese observee leur est totalement attribuable. Il n'y a pas d'insertion preferentielle d'adenine en face des sites abasiques. La seconde partie de ce travail a porte sur l'etude de la mutagenese induite par un site abasique unique. Nous avons tout d'abord utilise un systeme de vecteur navette a adn double brin, puis nous avons developpe un systeme de vecteur navette a adn simple brin. Dans le premier cas, nous avons pu montre que le site abasique etait repare avec une efficacite de l'ordre de 99%. Dans les deux cas, les quatre bases de l'adn sont inserees au hasard en face du site abasique


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Informations

  • Détails : 135 P.
  • Annexes : 151 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Accessible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1993
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