Peptide fusiogene et polymeres polycationiques : synthese et etudes de l'internalisation et des effets sur le passage transmembranaire d'acides nucleiques

par CHRISTINA PELLERIN MENDES

Thèse de doctorat en Sciences médicales

Sous la direction de P. MIDOUX.

Soutenue en 1993

à Orléans .

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  • Résumé

    Depuis plusieurs annees se developpent de nouvelles strategies therapeutiques fondees sur le ciblage de molecules d'interet biologique (en particulier des genes et des oligonucleotides antisens) pour augmenter leur selectivite et leur penetration dans des cellules cibles. Le ciblage a pour but d'augmenter la penetration de ces molecules dans le compartiment intracellulaire ou elles doivent agir, c'est a dire dans le cytosol et/ou le noyau, dans le cas des genes et des oligonucleotides antisens. Les acides nucleiques sont fixes ou associes a des glycoconjugues reconnus par des lectines membranaires qui induisent leur internalisation specifique par voie d'endocytose. Il a ete montre que, par ce processus, les acides nucleiques cibles se concentrent dans des vesicules intracellulaires (endosomes et lysosomes) dont le ph est acide. Cependant pour atteindre leur cible et avoir un effet biologique, les acides nucleiques doivent traverser la membrane des endosomes pour penetrer dans le cytosol, avant d'atteindre les lysosomes, ou ils seront degrades. Afin de favoriser un passage transmembranaire a partir des endosomes dans le cytosol, nous avons elabore deux strategies fondees sur l'utilisation de polypeptides, tels que la polyhistidine, et de peptides, connus pour avoir des proprietes fusiogenes en milieu acide, lesquels devraient permettre de destabiliser la membrane des vesicules d'endocytose et favoriser un passage transmembranaire dans le cytosol. Dans un premier temps, nous avons synthetise des polymeres polyimidazoles neutres contenant des residus histidyles ou 4-acetyl imidazoles, qui en se protonant a ph < 6, deviennent polycationiques. Nous avons montre que le polymere polyimidazole est faiblement internalise par ces cellules dans des vesicules acides et que le polymere cible est internalise plus efficacement que le polymere libre dans le cas des cellules j774e. Dans un second temps, nous avons synthetise un peptide doue de proprietes fusiogenes a ph legerement acide. Nous avons montre que le peptide fusiogene est fortement internalise et qu'il se concentre dans des vesicules intracellulaires. De plus, l'utilisation du peptide fusiogene, comme agent destabilisateur des membranes des vesicules d'endocytose, augmente tres fortement l'efficacite de transfection des cellules hepg2 par un complexe plasmide/poly-l-lysine lactosylee reconnu et internalise via la lectine membranaire de ces cellules. Ces resultats ouvrent des perspectives interessantes dans le domaine de l'utilisation des acides nucleiques comme agents therapeutiques et en particulier pour l'utilisation des genes en therapie genique


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  • Détails : 209 P.
  • Annexes : 149 REF.

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