Transformation genetique de peupliers hybrides par agrobacterium tumefaciens : application a la resistance aux insectes

par JEAN-CHARLES LEPLE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de F. DELMOTTE.

Soutenue en 1993

à Orléans .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Parmi les especes d'arbres forestiers ameliorees genetiquement, le peuplier (populus spp. ) a ete choisi comme espece modele pour developper deux techniques de transformation genetique utilisant a. Tumefaciens comme vecteur de transfert de genes. Un clone hybride populus tremula xp. Alba a servi a la mise au point des techniques de coinoculation et de coculture. Ces deux techniques ont ete utilisees pour introduire dans ce clone modele un gene mute de l'acetolactate synthetase isole d'arabidopsis thaliana. Des peupliers transgeniques resistants a l'herbicide chlorsulfuron ont ete regeneres. Dans le but d'obtenir des peupliers transgeniques tolerants aux attaques d'insectes, deux adnc codant pour des inhibiteurs de proteases a serine (cii) et a cysteine (oci) ont ete introduits dans notre clone modele. Des peupliers transgeniques exprimant l'un ou l'autre de ces inhibiteurs de proteases ont ete regeneres et testes pour leur toxicite vis a vis de larves de deux coleopteres phytophages: chrysomela populi et c. Tremulae. Aucune difference significative des pourcentages de mortalites globales n'a ete observee entre les plantes controles et transformees, du fait de fortes mortalites larvaires obtenues avec les plants temoins non transformes. Un clone hybride de tremble (p. Tremula x p. Tremuloides), mieux adapte aux tests d'alimentation in vitro avec les chrysomeles, a alors ete transforme par coculture et par coinoculation. Les adnc correspondant aux inhibiteurs de protease cii et oci ont ete introduits dans ce clone. Dans une deuxieme approche, une sequence codant pour une delta-endotoxine de bacillus thuringiensis, active contre les chrysomelidae (cryiiia), a egalement ete transferee dans ce meme clone. La caracterisation des plantes transformees a ete commencee, et l'essentiel des outils necessaires a cette caracterisation a ete mis en place


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  • Détails : 154 P.
  • Annexes : 293 REF.

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