Etude des interactions du facteur d'élongation eucaryote eEF-2 avec les nucléotides guanyliques et adényliques par les techniques de fluorescence

par Bruno Sontag

Thèse de doctorat en Sciences. Biochimie

Sous la direction de Jean-Paul Reboud.

Soutenue en 1993

à Lyon 1 .

Le jury était composé de Jean-Paul Reboud.


  • Résumé

    Le facteur d'elongation eucaryote ef-2 (eef-2) catalyse, au cours de l'etape d'elongation de la synthese proteique, la translocation du peptidyl-arnt du site a au site p du ribosome en presence de gtp. Il presente une fluorescence intrinseque caracteristique des tryptophanes, au nombre de 7 dans la molecule de ef-2, avec une longueur d'onde d'excitation maximale a 280 nm et un pic d'emission centre sur 333 nm, qui suggere un environnement relativement hydrophobe de ces tryptophanes. La denaturation de eef-2 par le chlorhydrate de guanidinium 6 m deplace ce maximum d'emission vers 348 nm et diminue l'intensite du pic de 35%. La variation de fluorescence en fonction de la concentration d'agent attenuateur, non charge et penetrant (acrylamide) ou ionique (iodure), confirme que les tryptophanes de ef-2 sont relativement enfouis dans la molecule et presentent une importante heterogeneite. L'attenuation de la fluorescence de eef-2 par les nucleotides permet de caracteriser, en l'absence des ribosomes, les interactions du facteur avec les nucleotides guanyliques. De plus, cette approche demontre, pour la premiere fois, une interaction avec les nucleotides adenyliques alors qu'aucun effet n'est observe avec les nucleotides cytidyliques. Dans le cas du gtp, ce changement conformationnel est egalement caracterise par une diminution importante de la fraction accessible a l'acrylamide. L'interaction avec les nucleotides adenyliques a ete confirmee par l'utilisation d'analogues


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Informations

  • Détails : 1 vol. (155 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 135-153

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  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
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