Evaluation des activités endoglycosidases : caractérisation d'une endo-N-acétyl-B-D-glucosaminidase de Stigmatella aurantiaca DW4

par Sylvain Bourgerie

Thèse de doctorat en Biochimie

Sous la direction de Ioannis Karamanos.


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  • Résumé

    Le travail entrepris a pour but de comprendre le role biologique des endoglycosidases en tant que marqueurs d'evenements cellulaires. L'introduction vise a preciser les caracteristiques des endo-beta-n-acetylglucosaminidases qui constituent de precieux outils d'investigation de la structure et des fonctions des n-glycosylproteines. Peu de donnees sont disponibles sur le role biologique de ces enzymes. Dans le premier chapitre est rappele les methodes generalement employees pour determiner l'activite des endoglycosidases, les limites de ces methodes et le choix d'un glycopeptide commercial marque a la resorufine pour la mise au point d'une procedure originale. Une glycoasparagine marquee a la resorufine est egalement preparee, purifiee et utilisee comme substrat. Dans le deuxieme chapitre, apres une introduction sur les myxobacteries, il est decrit la mise en evidence de l'activite enzymatique chez ce microorganisme. Le schema de purification retenu permet de recuperer l'enzyme suffisamment pure pour obtenir sans ambiguite sa sequence n-terminale. Sa masse moleculaire est de 27 kda, son phi de 6,8 et le ph optimum pour une glycoasparagine a 7 residus de mannose est de 4,5. L'enzyme est active sur des substrats de type oligomannosidique et mixte. Une correlation est apportee entre l'expression de cette enzyme et l'etat de differenciation de stigmatella aurantiaca. La recherche du gene codant pour cette enzyme a abouti a l'obtention de clones selectionnes sur la base de leur hybridation avec une sonde pcr, elaboree par une strategie d'homologies de sequence

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Informations

  • Détails : 159 p
  • Annexes : Bibliogr. pp 139-154

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