Mise en œuvre de la chromatographie liquide haute performance dans le cadre du suivi hors ligne et en ligne des protéines de cultures d'hybridomes : caracterisation de la méthode chromatographique et comparaison avec le test ELISA

par Isabelle Gaillard

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Jean-Marc Engasser.

Soutenue en 1993

à Vandoeuvre-les-Nancy, INPL .


  • Résumé

    Depuis la mise au point des techniques de formation des lignées d'hybridomes, des efforts importants sont fournis pour améliorer la productivité des anticorps monoclonaux et pour mieux comprendre le métabolisme cellulaire. Les méthodes analytiques jouent un rôle important dans le contrôle des procédés en permettant la détermination quantitative et qualitative de plusieurs paramètres et variables. L'objectif général de cette étude consiste à contribuer à l'amélioration de la maitrise des bioprocédés en proposant une méthode analytique capable de quantifier les protéines présentes dans les cultures d'hybridomes. Afin d'atteindre cet objectif, les potentialités de l'HPLC ont été testées. Les protéines considérées dans cette étude sont d'une part, les composes protéiques propres au milieu de culture et d'autre part, les anticorps monoclonaux secrétés par les cellules. La première partie de cette étude présente l'optimisation des conditions opératoires de la méthode chromatographique. Les deux modes chromatographiques mis à profit sont l'HPLC d'affinité et la RP-HPLC. Une étude comparative des performances de la méthode par HPLC et du test ELISA est exposée dans une seconde partie. La troisième partie concerne l'application de la méthode chromatographique aux suivis des protéines de cultures cellulaires d'hybridomes. Enfin, la réalisation couplage automatise réacteur-échantillonneur-HPLC et son application à la détermination en ligne de la concentration des IgG d'une culture discontinue, constituent la dernière partie de ce travail

  • Titre traduit

    Off-line and on-line monitoring of proteins from hybridoma cultures by high performance liquid chromatography : analytical method caracterization and comparison with ELISA


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  • Annexes : 268 ref.

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