Développement de la spectrométrie de masse appliquée au séquençage protéique en association avec la dégradation d'Edman : détermination des structures primaires de la sous-unité Aa6 de l'hémocyanine du scorpion Androctonus australis et de la catalase bactérienne de Proteus mirabilis

par Armelle Buzy

Thèse de doctorat en Biologie

Sous la direction de Jean Gagnon.

Soutenue en 1993

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    Le but de ce travail est de developper des strategies analytiques utilisant differentes techniques de spectrometrie de masse (sm) en association avec la degradation d'edman pour le sequencage proteique. La premiere partie du travail a permis d'estimer les possibilites de methodes de sm en tandem pour la determination de la sequence de petits peptides. Dans la deuxieme partie du travail, la sous-unite aa6 de l'hemocyanine du scorpion androctonus australis a ete choisie comme modele d'etude. Les hemocyanines sont des pigments respiratoires presents chez les mollusques et arthropodes. La sous-unite aa6 a ete scindee chimiquement et enzymatiquement. Les peptides obtenus ont ete analyses par sm et degradation d'edman. La sm a apporte des donnees souvent indispensables a la degradation d'edman en levant des incertitudes sur la taille des peptides et sur l'identite de certains residus. Certains petits peptides ont ete caracterises directement par sm en tandem. Tous les peptides ont ete positionnes grace aux homologies avec des sequences d'hemocyanines d'autres arthropodes. Trois ponts disulfures ont ete reveles et localises par l'etude en sm de la proteine sous ses formes native, alkylee et reduite-alkylee. Les etudes realisees ont conduit a la sequence complete de la proteine (626 residus, 72 kda) et a la mise au point d'une methodologie utilisant conjointement le sequencage chimique et la sm. La troisieme partie du travail a porte sur l'etude de la sequence de la catalase de la bacterie proteus mirabilis. La sequence n-terminale proposee par genetique moleculaire (307 residus) a ete verifiee et la sequence c-terminale (177 residus) determinee

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  • Détails : 279 p
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  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire de Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TS 93/GRE1/0019
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