Production et culture de protoplastes de l'algue agarophyte gracilaria verrucosa (huds. ) papenfuss (rhodophycees, gigartinales). Contribution a l'etude des potentialites de regeneration parietale

Production and culture of protoplasts from an agarophyte alga gracilaria verrucosa (huds. ) papenfuss (rhodophyceae, gigartinales). Study of the cell wall regeneration

• Auteur / Autrice : Jean-Claude Mollet
• Direction : Yves Lemoine
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Compiègne

Résumé

La production de protoplastes de l'algue agarophyte a thalle complexe, gracilaria verrucosa, est realisee par l'action simultanee de deux enzymes: une agarase isolee a partir d'une souche bacterienne marine pseudomonas atlantica et une cellulase commerciale de trichoderma viride. Chaque enzyme est capable de degrader respectivement la phase matricielle et la phase fibrillaire de la paroi dans une milieu dont la salinite de l'eau de mer est reduite de moitie. L'optimisation des parametres composant le milieu de digestion conduit a l'obtention de rendements de l'ordre de 0,5 a 2 10#6 protoplastes par g d'algue (mf) mais fluctuent fortement selon le choix du materiel donneur. Avec l'utilisation des parties jeunes ou des algues a croissance elevee, les rendements peuvent etre fortement ameliores pour atteindre 5-15 10#6 protoplastes par g d'algue (mf). Les modifications qualitatives et quantitatives de la paroi des thalles de g. Verrucosa sont en partie a l'origine de ces variations de rendements. La viabilite cellulaire, estimee en microscopie et par la mesure de la fluorescence variable de la chlorophylle a, est tres dependante de la nature de l'osmoticum et de la pression hydrique du milieu de culture. Dans les meilleures conditions, 25 pourcents des protoplastes sont capables de regenerer une nouvelle paroi. Malgre quelques divisions cellulaires, aucun protoplaste n'a permis de neoformer un thalle. Une analyse des polysaccharides des protophastes pendant les premieres heures de culture revele une composition chimique pauvre en 3,6 anhydro-l-galactose, en 6-0- et en 4-0-methyl-galactose qui caracterise un agar jeune ou nouvellement synthetise