Relation structure fonction : la chromatographie d'affinite sur ion metallique immobilise, outil d'etude de la structure de differentes enzymes

Structure function relationship. Immobilized metal ion affinity chromatography: a complementary tool for protein structure studies

• Auteur / Autrice : PATRICK BERNA
• Direction : Mookambeswaran A. Vijayalakshmi
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Compiègne

Résumé

L'etude de la structure des proteines est d'un interet majeur en biologie, pour permettre de comprendre et interpreter le fonctionnement des proteines. Dans ce cadre, la chromatographie d'affinite sur ions metalliques immobilises (imac) est une methode chromatographique de choix pour etudier les changements de conformation de proteines impliquant des modifications du microenvironnement de leur residus histidines accessibles. Nous avons applique cette methode chromatographique a l'etude de la cyclodextrine glycosyl transferase de bacillus alkalophillus recombinee chez escherichia coli, dont la structure tridimensionnelle n'est pas connue. Cette etude nous a permis d'obtenir des informations sur la presence d'histidine (s) accessible (s) en surface de la proteine. Basee sur la capacite de ces histidines a provoquer la microchelation, leur presence dans une structure secondaire particuliere a ete proposee. L'absence d'histidine accessible dans le site de liaison specifique de la cyclodextrine a ete demontree. Nous avons egalement etudie par cette methode chromatographique les changements de conformation de la chymotrypsine de boeuf suite a son processus de maturation du chymotrypsinogene en ses differentes sous-especes actives. La non implication de l'histidine du site actif de la chymotrypsine (protease a serine) dans le phenomene de reconnaissance en imac est demontree. Le site d'interaction des chymotrypsines avec le chelate metallique d'ida-cu(ii) a ete determinee comme etant l'histidine 40 et les retentions differentielles des differentes sous-especes interpretees comme etant la resultante d'une modification des liaisons hydrogenes impliquant ce residu histidine. La prise en consideration, pour la premiere fois, des liaisons hydrogenes impliquant les residus histidines accessibles d'une proteine pour l'explication de leur participation ou non participation a un phenomene de reconnaissance en imac represente la contribution originale de ce memoire