Proprietes physico-chimiques et regulation de la pyrophosphatase pompe a protons du tonoplaste d'acer pseudoplatanus

par ANNICK FRAICHARD

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Alain Pugin.

Soutenue en 1993

à Besançon .

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  • Résumé

    Chez les plantes superieures, la membrane vacuolaire ou tonoplaste renferme, au cote d'une h#+-atpase, une h#+-pyrophosphatase (h#+-ppase). Le gradient electrochimique de h#+ mis en place par ces 2 enzymes est la source d'energie pour divers transports secondaires entre le cytoplasme et la vacuole. Notre travail a eu pour objectif d'etudier les proprietes physico-chimiques de la h#+-ppase du tonoplaste de cellules isolees d'acer pseudoplatanus l. , son mode de regulation et ses interactions avec l'h#+-atpase. Des preparations de vesicules de tonoplaste d'un tres haut degre de purete sont obtenues a partir de vacuoles isolees de protoplastes. Le tonoplaste d'acer pseudoplatanus renferme une h#+-ppase qui couple l'hydrolyse du pyrophosphate a un transport de h#+. Le ph optimum, le substrat reel et le km, l'effet des ions et des inhibiteurs, ont ete determines. La masse moleculaire fonctionnelle a ete estimee par la technique d'irradiation inactivation. Apres solubilisation du tonoplaste la ppase a ete purifiee et sa composition polypeptidique determinee. Les proprietes de la ppase du tonoplaste d'a. Pseudoplatanus suggerent que cette enzyme correspond a la ppase du tonoplaste d'arabidopsis thaliana dont l'adnc a ete clone et sequence. Les effets du magnesium et du calcium sur l'activite de l'enzyme ont ete etudies. Les resultats obtenus montrent que ces ions sont certainement impliques dans la regulation de l'h#+-ppase in vivo. Enfin, nous avons montre que le transport de h#+ par la ppase est sous la dependance de l'h#+-atpase du tonoplaste


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  • Détails : 178 P.
  • Annexes : 152 REF.

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