Transformation et transposiiton chez une souche de Salmonella typhimurium TA1538 : contribution à la mise au point d'un salmonella/multitest pour la détection des agents génotoxiques

par Michèle Gentil

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et microbiologie

Sous la direction de Gérard Duménil.


  • Résumé

    Les principaux tests courts de genotoxicite utilisant des cellules procaryotes presentent certaines limites. Afin de completer cette batterie de tests, il serait interessant de realiser un test d'induction lytique avec une des souches d'ames: salmonella typhimurium ta1538 (delta uvrb, hisd3052, rfae) lysogene pour le bacteriophage fels2. Pour cela, il serait avantageux de construire, par la technique de fusion de genes ou d'operons, une souche avec laquelle l'induction lytique pourrait etre suivie par un dosage de la beta-galactosidase (par reference au biochemical induction assay). Dans cette optique, ce travail consistait en la mise au point des conditions experimentales permettant d'adapter a la souche ta1538 la technique de construction des fusions de genes ou d'operons a l'aide de transposons. Le vecteur de transposon le plus utilise etant le phage lambda, nous avons rendu cette souche sensible a ce phage par transformation avec le plasmide pamh70 (lamb#+, nusa#+) qui confere aussi une resistance a l'ampicilline. En raison du genotype rfae de la souche ta1538, des transformants n'ont pu etre obtenus que par electroporation. Les conditions de transformation ont ensuite ete optimisees en appliquant la methodologie experimentale a l'electroporation. Par la suite, la mise au point des conditions experimentales de transposition a egalement pose un probleme en raison de la faible stabilite du plasmide pamh70 dans la souche ta1538. En effet, la pression de selection adoptee (150 microgrammes d'ampicilline par millilitre) pour maintenir ce plasmide dans salmonella typhimurium lb5010 s'est revelee insuffisante pour la souche ta1538. Des clones de transposition ont alors ete isoles avec les phages lambda placmu en modifiant la concentration en ampicilline des milieux de culture utilises


  • Pas de résumé disponible.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 127 f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr.f. 101-115

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Aix-Marseille (Marseille. Luminy). Service commun de la documentation. Bibliothèque de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 22208
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.