Contribution à l'ètude de la colipase pancréatique humaine : isolement par chromatographie d'immunoaffinité à partir du suc pancréatique, préparation et caractérisation d'anticorps monoclonaux

par Christine Dezan

Thèse de doctorat en Biologie

Sous la direction de Louis Sarda.

Soutenue en 1993

à Aix-Marseille .


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  • Résumé

    La reactivite croisee de huit anticorps monoclonaux diriges contre la colipase pancreatique de porc a ete etudiee a l'aide du test immunoenzymatique elisa. L'anticorps 72. Il reagit specifiquement avec la forme longue de la colipase (procolipase) humaine et de porc et ne forme pas de complexe avec la forme courte privee du penta peptide n-terminal par trypsinolyse limitee de la liaison arg#5-gly#6. L'anticorps 72. Il a ete utilise pour determiner, par immunoinactivation, les quantites des formes longue et courte de la coliase dans le suc pancreatique humain et, apres immobilisation, pour separer par chromatographie d'immunoaffinite, en une seule etape, la procolipase du suc. La procolipase humaine a ete caracterisee par electrophorese, hplc en phase inversee, spectrometrie de masse et microsequencage. Une seule forme de procolipase humaine possedant 94 residus (lysine c-terminale) a ete obtenue. Contrairement a la procolipase de porc, la liaison 5-6 est instable a ph acide. Le traitement par les carboxypeptidases a et b enleve la lysine 94 et la serine 93 sans perte d'activite. Une serie d'anticorps monoclonaux diriges contre la colipase humaine (forme longue) ont ete produits. Onze d'entre eux, de type igg, ont ete caracterises par leur reactivite en elisa vis-a-vis de la forme longue et courte, native et denaturee de l'antigene, leur capacite a inhiber la colipase et leur reactivite immunologique croisee. Ils ont ete classes en cinq groupes reconnaissant des epitopes distincts ou se recouvrant partiellement. L'anticorps 5. 30 inhibe la colipase en se fixant a proximite du site d'interaction avec le lipide

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