Structure et fonction de la colipase pancréatique : isolement de la colipase de porc (formes précurseur et activée) en vue de l'étude de sa structure tridimensionnelle par cristallographie

par Nathalie Rugani

Thèse de doctorat en Biologie

Sous la direction de Louis Sarda.


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  • Résumé

    Les relations structure-fonction de la colipase pancreatique ont ete etudiees par une approche immunochimique a l'aide de huit anticorps monoclonaux et des fractions d'anticorps polyclonaux separees sur peptides synthetiques immobilises. La reactivite des anticorps en elisa, l'immunoinactivation de l'activite lipase colipase-dependante et l'identification des complexes antigene-anticorps binaires et tertiaires par hplc (filtration sur gel) ont montre le role essentiel de la region centrale 50-60 et de la region n-terminale de la colipase dans la formation du complexe actif colipase-lipase a l'interface. La colipase a ete purifiee a partir de pancreas de porc. L'homogeneite des preparations a ete verifiee par sequencage, spectrometrie de masse, electrophorese et hplc en phase inversee. La colipase de porc a ete co-cristallisee avec la lipase pancreatique humaine en absence et en presence de lipides micellaires. Les sites de fixation de la colipase au lipide et a la lipase ont ete identifies dans le complexe dont la structure a ete resolue a 3 angstroms. Les regions 29-38, 50-60 et 70-86 interagissent avec le lipide (site lipide) et les regions 44-46, 65-67 et 89 s'associent au domaine c-terminal de la lipase. En presence de lipide, le volet (boucle 238-260) qui empeche l'acces a la triade catalytique de la lipase s'ouvre et s'associe a la region n-terminale de la colipase (6-25). La determination de la structure 3-d de la colipase par rmn confirme les resultats de la cristallographie et la position des cinq ponts disulfures 17-28, 23-29, 27-61, 49-69 et 63-87

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Informations

  • Détails : 101f
  • Annexes : 152 REF.

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