Transfert de genes dans les cyanobacteries unicellulaires : construction d'un vecteur d'expression conditionnelle a large spectre d'hote

par PIERRE MERMET-BOUVIER

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de FRANCK CHAUVAT.

Soutenue en 1992

à Paris 11 .

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  • Résumé

    Les travaux presentes dans cette these portent sur la mise au point d'un systeme de transfert de genes et de vecteurs d'expression associes chez les cyanobacteries unicellulaires. Il est apparu que la transformation naturelle ne permet pas d'introduire de grands plasmides chez synechocystis pcc 6803. Ceci est par contre possible avec la conjugaison de vecteurs derives du plasmide rsf1010 qui est egalement efficace chez 3 autres cyanobacteries unicellulaires synechocystis pcc6714, et les synechococcus sp. Pcc7942 et pcc 6301. Nous avons ensuite construit un vecteur d'expression pfci base sur rsf1010 et contenant le promoteur fort pr du phage lambda et le gene ci857 qui code pour le represseur thermosensible associe. Pfci a ete teste en clonant le gene de la beta-galactosidase d'e. Coli (pmb13) et le gene de la proteine a de s. Aureus (pif2). Les tests de production de ces deux proteines ont permis: 1) de montrer que l'expression du gene gouvernee par le promoteur pr est parfaitement thermoregulee; 2) de definir les conditions optimales d'induction. La beta-galactosidase represente de 5 a 10% des proteines solubles chez s. 6803 et e. Coli et de 10 a 15% chez s. 7942. La production de proteine a est quant a elle plus faible. Ce type de vecteur devrait s'averer tres utile pour tous les travaux qui necessitent la surproduction de proteines chez les cyanobacteries, soit sous forme directe (plasmide pfci) soit sous forme de fusion avec la beta-galactosidase (pmb13)


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  • Annexes : 373 REF

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-011068
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