Transfert de genes chimeriques chez nicotiana tabacum. Expression transitoire et expression stable du gene codant pour la gus sous le controle de differents promoteurs

par ALINE CLERGUE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de FRANCIS QUETIER.

Soutenue en 1992

à Paris 11 .

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  • Résumé

    L'objectif de ce travail est l'etude en expression transitoire et stable de la partie codante du gene uida sous le controle de differents promoteurs: le promoteur de l'orf14 precede ou non des sequences enhancer du promoteur 35s. Le promoteur 35s auquel a ete integre les l. R. E. De la ssu (lre35s). Le promoteur 35s precede de tandems de 2,4 ou 5 enhancers du promoteur 35s. Le promoteur 35s est pris en reference. Cette etude a necessite: la mise en place d'une methodologie efficace de transfert pour la mesure de l'expression transitoire du gene uida apres electroporation de protoplastes. Differents parametres ont ete definis. L'optimisation a ete realisee par planification experimentale. Cette approche s'es revelee une technique efficace, et a ete appliquee, avec succes, aux protoplastes de colza. L'obtention de plantes transgeniques: elle a ete realisee par la culture de disques foliaires de tabac avec a. Tumefaciens. Les plantes transformees sont selectionnees pour leur resistance a la kanamycine. Le reperage des plantes exprimant le gene uida est realise par revelation histochimique puis dosage fluorimetrique. L'integration du gene uida a ete etablie par analyse moleculaire pour certaines plantes et la transmission a la descendance du gene nptii etudiee. La planification experimentale a permis d'augmenter d'un facteur 3 a 5 le niveau d'expression de la gus. En expression transitoire le promoteur de l'orf14 et le promoteur lre-35s conferent respectivement une activite gus tres inferieure ou peu differente de celle conferee par le promoteur 35s. Des resultats comparables sont retrouvees en expression stable


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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-010956
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