Etude cristallographique d'un anticorps anti-idiotope, e5. 2

par Anne Houdusse

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de ROBERTO POLJAK.

Soutenue en 1992

à Paris 11 .

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  • Résumé

    L'unite d'immunologie structurale de l'institut pasteur etudie la structure tridimensionnelle des anticorps et des complexes antigene-anticorps monoclonaux au moyen de techniques radio-cristallographiques. D1. 3 est un anticorps monoclonal anti-lysozyme de blanc d'uf de poule. L'anticorps e5. 2 reconnait un idiotope prive de d1. 3. L'obtention de sa structure au moyen de la radiocristallographie suivie de projets permettant de localiser l'idiotope au niveau moleculaire devrait preciser un des sites antigeniques de d1. 3. La comparaison structurale de ce site avec le paratope et avec un autre idiotope de ce meme anticorps (site reconnu par un autre anticorps anti-idiotope nomme r225) pourra alors etre envisagee. Le travail cristallographique realise comporte l'etude du site de reconnaissance de l'anticorps e5. 2 non complexe. Les cristaux de fab e5. 2 comportent deux molecules par unite asymetrique. La resolution de la structure a ete effectuee par remplacement moleculaire. Cette etape a fait intervenir une fonction de translation particuliere appelee fonction de translation phasee plus rarement utilisee que les autres fonctions de translation. Apres affinement de la structure a moyenne resolution, le facteur r est egal a 18. 7% alors que la stereochimie du modele est correcte. La structure du fab e5. 2 a notamment permis d'identifier une conformation tout a fait particuliere pour le cdr3 de la chaine lourde long de 13 residus. La conformation de cette boucle sera comparee a celle d'autres anticorps. Afin d'identifier directement le site idiotope de d1. 3, l'obtention d'une forme cristalline complexee entre les deux anticorps a ete envisagee a partir des fragments fv obtenus apres clonage et expression de ces proteines dans une bacterie escherichia coli. Les etapes d'induction et d'expression des proteines ainsi que la purification conjointe des deux fragments fv ont ete realisees avec succes. Les essais de cristallisation du fv libre et du complexe entre les fv d1. 3 et e5. 2 sont en cours


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  • Annexes : 155 REF

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-010937
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