Investigations sur la transformation du ble

par Nicolas Martin

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Emmanuel Picard.

Soutenue en 1992

à Paris 11 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    L'objectif initial de la these etait d'utiliser le pollen comme vecteur pour transformer le ble tendre. Dans un premier temps nous avons cherche a optimiser la detection d'un evenement de transformation en etudiant les genes marqueurs: gus et nptii. Nous avons montre qu'il est difficile de choisir un seuil de toxicite permettant de selectionner une eventuelle plante transgenique. Par contre la fonctionnalite des constructions geniques gus dans les tissus de ble a pu etre facilement determinee en observant l'expression transitoire par un test histochimique ou fluorimetrique. Malgre l'emploi de differentes techniques de fecondation, la mise au point d'une solution protegeant les plasmides des nucleases et compatibles avec la survie du pollen, aucune plante n'a exprime un gene marqueur. Dans nos conditions experimentales, nous pouvons conclure au risque de cinq pour cent, que la probabilite de deceler une plante transformee est inferieure a un pour cent. Nous avons alors employe une seconde voie, celle du canon a particules. Les essais d'expression transitoire realises sur differents tissus nous ont conduit a bombarder une suspension cellulaire de triticum monococcum avec un plasmide contenant les deux genes marqueurs nptii et gus. Apres six mois d'une pression de selection par la kanamycine, nous avons obtenu quatre suspensions cellulaires dont l'analyse pcr a revele la presence du gene uida. Grace au test fluorimetrique, nous avons pu deceler une activite gus parmi trois de ces souches. Ces resultats permettent d'envisager que la transformation d'une suspension cellulaire de ble semble facile


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Informations

  • Annexes : 111 REF

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-010706
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